试剂盒组成

荧光PCR反应液:含SYBR Green I染料、dNTPs、Mg²⁺及缓冲体系。
阳性对照:1×10⁸拷贝/μL多子小瓜虫DNA片段(非活体样本,避免生物污染)。
模板稀释液:用于标准曲线制备的专用稀释液。
说明书及质检报告。
产品名称 | 多子小瓜虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Ichthyophthirius multifiliis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3686 |

操作步骤

(一)样本准备
样本采集与处理:
按常规方法采集样本(如鱼体表黏液或组织),提取DNA。
自备DNA提取试剂,确保纯度(A260/A280≈1.8-2.0)。
保存与运输:样本需-20℃保存,运输时避免反复冻融。
(二)阳性对照稀释(标准曲线制备)
稀释步骤:
标记6管,分别加入45 μL模板稀释液。
梯度稀释阳性对照(10⁷-10²拷贝/μL):
7号管:5 μL原液(10⁸拷贝/μL)→ 10⁷拷贝/μL。
依次稀释至2号管(10²拷贝/μL),每次换枪头,震荡混匀后冰上静置。
注意事项:
独立操作区进行,避免交叉污染。
(三)PCR反应体系
反应程序:
预变性:92℃ 5分钟。
扩增循环(30次):
94℃ 60秒 → 50℃ 60秒 → 72℃ 60秒。
信号采集:复性或延伸阶段(推荐530 nm波长)。
仪器设置:根据设备型号优化参数。
(四)数据分析
定量检测:
以阳性对照log浓度为横轴,Ct值为纵轴绘制标准曲线。
通过样本Ct值推算DNA浓度。
注意事项

安全防护:操作时穿戴防护装备,避免试剂接触皮肤。
污染控制:分区操作(样本处理、PCR配制、扩增区),使用带滤芯枪头。
质量控制:每批次实验需包含阴性对照(无模板对照)。
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