星状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 星状病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Astrovirus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3808 |
产品概述
本试剂盒采用SYBR Green I染料法荧光定量RT-PCR技术，专为星状病毒（Astrovirus）核酸的高灵敏度检测设计。通过优化的一步法反应体系，实现反转录（RT）与实时定量PCR（qPCR）在同一反应管内完成，减少操作步骤，降低污染风险。试剂盒适用于临床样本、环境样本或科研中病毒RNA的定性与定量分析。
产品组分
2× RT-qPCR预混液：含缓冲液、dNTPs、Mg²⁺及稳定剂（250 μL/管）。
逆转录酶与热启动Taq酶混合液：高效合成cDNA并实现高特异性扩增（20 μL/管）。
无核酸酶水（250 μL/管）。
阳性对照（非传染性DNA片段，1×10⁸拷贝/μL）。
技术参数
灵敏度：可检测至0.1 pg病毒RNA（高表达靶标）或1 pg（中表达靶标）。
线性范围：定量检测覆盖5个数量级（10²–10⁷拷贝/μL）。
特异性：引物针对星状病毒保守区设计，无交叉反应。
稳定性：预混液在4℃下可保存24小时，性能不变。
操作步骤
1. 标准曲线制备
标记离心管（7–2号），每管加入45 μL专用稀释液。
取5 μL阳性对照加入7号管，震荡混匀（10⁷拷贝/μL），依次梯度稀释至10²拷贝/μL。
2. 反应体系配制（20 μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×预混液 | 10 |
| 酶混合液 | 0.5 |
| 引物（上下游各10 μM） | 0.4 |
| 模板RNA | 2 |
| 无核酸酶水 | 至20 |
3. 程序设置
逆转录：50℃ 15分钟。
预变性：95℃ 5分钟。
PCR扩增：95℃ 10秒 → 60℃ 30秒（40循环），熔解曲线分析（65–95℃）。
注意事项
操作需在独立区域进行，避免气溶胶污染。
阳性对照仅用于体系验证，不可替代临床样本质控。
本产品限科研使用，临床诊断需经额外验证。
储存条件
-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。
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