产品特点
即开即用：用户仅需提供待测DNA样本，试剂盒包含预混反应液，无需额外配制。
高特异性：针对脆弱拟杆菌保守序列设计引物，与其他肠道菌群无交叉反应。
高灵敏度：检测限可达数百拷贝/反应。
一管式检测：采用封闭式荧光定量PCR，避免扩增产物污染。
兼容性：适配常见荧光定量PCR仪，支持染料法检测（激发波长471 nm，发射波长530 nm）。
产品名称 | 脆弱拟杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Bacteroides fragilis Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3706 |
实验步骤
样本准备：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
反应体系配制：
在标记管中加入以下成分（以20μL体系为例）：
预混PCR反应液（含dNTPs、Mg²⁺、Taq酶）
特异性引物对
荧光染料（结合DNA后最大吸收峰500 nm）
模板DNA（≤5 μL）
阴性对照（无模板水）与阳性对照（含脆弱拟杆菌标准品）需同步设置。
PCR程序设置：
预变性：95℃ 2分钟；
扩增循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（信号采集步骤），共40个循环。
注：具体参数可根据仪器型号优化。
结果分析
定量检测：
以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。
通过待测样本Ct值计算DNA浓度。
定性检测：
阴性对照Ct值≥40，阳性对照Ct值≤30且呈典型扩增曲线。
待测样本判定：
Ct≤35：阳性；
Ct≥40：阴性；
35<Ct<40：需重复检测，若重复Ct<40判为阳性。
注意事项
操作需在无菌环境下进行，避免污染。
荧光染料需避光保存，防止淬灭。
试剂盒保存于-20℃，反复冻融不超过3次。
杆菌属通用试剂盒技术参数整理，具体应用需结合脆弱拟杆菌靶标序列优化验证。
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关键字： 脆弱拟杆菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;