微细毛圆线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒用于特异性检测微细毛圆线虫（Trichostrongylus tenuis）的核酸，基于荧光定量PCR技术，通过扩增保守基因序列实现高灵敏度、高特异性检测。适用于科研实验（严禁临床医疗用途），兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad系列）。

产品特点

即开即用：预混反应液含荧光染料、引物、dNTPs及热启动DNA聚合酶，仅需提供DNA模板。

高特异性：引物针对微细毛圆线虫保守区设计，无交叉反应。

质控系统：含阳性质控品（目标基因片段）和阴性质控品（超纯水），确保结果可靠性。

快速检测：全程约1.5小时，支持实时荧光监测或终点电泳分析。

组分与规格

| 成分 | 规格（50次装） |

| PCR预混液（含染料） | 1 mL（20 μL/反应） |

| 特异性引物混合液 | 100 μL |

| 阳性质控品 | 50 μL（1×10⁸拷贝/μL） |

| 阴性质控品 | 1 mL（超纯水） |

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；阳性质控品需单独存放，避免污染。

操作流程

1. 样本处理

DNA提取：使用核酸提取试剂盒从样本（如组织、血液）中纯化DNA，建议在生物安全柜中操作。

模板浓度：推荐使用10-100 ng/μL DNA。

2. 反应体系配制

| 组分 | 体积（μL） |

| PCR预混液 | 15 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板DNA/对照品 | 3 |

| 总体积 | 20 |

加样顺序：阴性对照→待测样本→阳性对照，避免交叉污染。

3. PCR扩增程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |

| 变性 | 95℃ | 10 sec | 35 |

| 退火 | 58℃ | 15 sec | |

| 延伸 | 72℃ | 20 sec | |

| 最终延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |

4. 结果分析

荧光定量法：FAM通道检测，阈值线需高于阴性对照扩增曲线。

阳性：Ct值≤45且曲线呈S型。

阴性：无Ct值或Ct值>45。

电泳法（可选）：取5 μL产物进行2%琼脂糖凝胶电泳，阳性样本可见约200 bp条带。

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

若样本无扩增，建议稀释10倍后复测以排除抑制剂干扰。

试剂解冻后需充分混匀，避免反复冻融。

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