试剂盒组成
2×qPCR Magic Mix：500 μL（棕色管，含荧光染料、dNTPs、聚合酶等）
荧光PCR专用模板稀释液：1 mL（黄盖）
库蚊通用qPCR引物混合液：100 μL（白盖，针对库蚊特异性基因保守区设计）
阳性对照：1管（含靶标基因片段）
产品名称 | 库蚊通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Culex spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3728 |
性能特点
高特异性：引物基于库蚊保守序列设计，可特异性检测库蚊DNA，排除非靶标物种干扰。
高灵敏度：荧光定量PCR技术，检测限低至单拷贝级别，优于常规PCR。
操作便捷：预混液即开即用，仅需提供DNA模板；闭管操作降低污染风险。
稳定性强：96复孔Ct值偏差<0.2，重复性优异。
快速检测：反应时间约46分钟（无需ROX校正）。
实验步骤
1. 试剂准备
将试剂从-20℃取出，置于冰上缓慢解冻（5-10分钟），轻弹混匀后短暂离心（1000 rpm，10秒）。
注意：避免剧烈震荡或室温解冻，以防酶活性降低。
2. 反应体系配制（20μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×qPCR Magic Mix | 10 |
| 引物混合液 | 0.8 |
| DNA模板 | 2 |
| 模板稀释液 | 7.2 |
3. qPCR程序设置
预变性：95℃, 3分钟
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）
4. 数据分析
使用仪器配套软件分析扩增曲线与Ct值，阳性对照应出现典型S型曲线。
注意事项
实验全程需使用无核酸酶耗材，避免外源DNA污染。
阳性对照与待测样本需分区域操作，防止交叉污染。
若样本Ct值≥35，建议重复检测或重新提取DNA。
质量控制
阳性对照：必须出现有效扩增曲线，否则实验无效。
阴性对照（以稀释液替代模板）：应无扩增信号。
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