饰纹汀蛙虹彩病毒染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 饰纹汀蛙虹彩病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Ranavirus sp. (Tiger Frog Isolate) Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3845 |
产品概述
本试剂盒专用于饰纹汀蛙虹彩病毒(Boheliridovirus, BIV)的荧光定量PCR检测,采用染料法(如SYBR Green I)或探针法(如FAM-BHQ1标记)实现高特异性、高灵敏度的病毒核酸定量分析。适用于科研用途,不可用于临床诊断。
试剂盒组成
PCR反应预混液:含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料(或预装探针)。
阳性对照:10^8拷贝/μL的BIV DNA片段(非活体样本,避免生物污染风险)。
阴性对照:无核酸酶水。
模板稀释液:用于标准品梯度稀释。
使用说明书(当前文件)。
操作步骤
标准品稀释(以10^2–10^7拷贝/μL梯度为例)
注意事项:
稀释操作需在独立洁净区域进行,避免交叉污染。
使用带滤芯枪头,所有离心管需预先标记(如7–2号对应10^7–10^2拷贝/μL)。
稀释流程:
在7号管中加入45 μL稀释液,再加入5 μL阳性对照(10^8拷贝/μL),涡旋混匀,得到10^7拷贝/μL标准品。
依次梯度稀释至2号管(10^2拷贝/μL),每步更换枪头并充分混匀。
PCR反应体系配制
按以下比例配制20 μL反应体系(以探针法为例):
预混液10 μL
引物混合液2 μL(上游引物:5’-AATGCTGACGAAATCATCAGTT-3’;下游引物:5’-TCCTTTTCCTCGTTGGAACAA-3’)
探针1 μL(FAM-BHQ1标记,序列:5’-TACGAATCGTTTCCCGTGAGACCCTTTAACG-3’)
模板DNA 2 μL
无核酸酶水补至20 μL
短暂离心后上机。
扩增程序设置
预变性:95℃ 3分钟
循环阶段(40 cycles):
95℃ 15秒
60℃ 30秒(荧光采集)
溶解曲线分析(染料法需增加此步骤)。
结果判读
定量分析:根据标准曲线计算样本中病毒拷贝数。
特异性验证:溶解曲线单峰或探针信号Ct值≤35为阳性。
质控要求:
阴性对照无扩增(Ct值≥40或无信号)。
阳性对照Ct值在预期范围内。
注意事项
试剂保存于-20℃,避免反复冻融。
实验废弃物需按生物安全规范处理。
本产品仅限科研使用,不适用于临床诊断。
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