猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

猪瘟病毒疫苗株染料法荧光定量RT-PCR试剂盒

商品属性

检测原理

基于荧光定量RT-PCR技术，通过特异性引物和荧光染料（结合DNA后激发波长500 nm，发射波长530 nm）实时监测扩增信号，结合标准曲线对病毒核酸进行定量分析。

用途：科研用途，适用于猪瘟病毒疫苗株的定性及定量检测。

试剂盒组分

荧光PCR反应液：含预混酶、dNTPs、缓冲体系及荧光染料。

阳性对照：非传染性DNA片段（无活病毒）。

阴性对照：无核酸酶水。

标准曲线样品：需用户自行稀释（建议10E2~10E7拷贝/μL梯度）。

操作步骤

1. 样本处理

使用合规核酸提取试剂提取样本RNA，避免交叉污染。

2. 标准曲线制备

按10倍梯度稀释阳性对照DNA（6个浓度点），独立操作以防污染。

3. PCR反应体系配制

每20μL反应体系包含：

10μL预混反应液

2μL引物探针混合液

2μL模板RNA/DNA

6μL无核酸酶水

4. 扩增程序

逆转录：50℃ 15分钟

预变性：95℃ 3分钟

循环扩增（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（信号采集）

5. 数据分析

定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性判定：

阳性：Ct≤35，且有典型扩增曲线；

阴性：Ct≥40；

可疑（35<Ct<40）：需复测确认。

注意事项

实验规范

分区分操作（样本处理、试剂配制、扩增检测）；

使用一次性耗材，避免气溶胶污染；

反应液避光保存，彻底混匀后离心。

局限性

基因变异或提取效率差异可能导致假阴性；

运输保存不当或操作误差可能影响检测准确性。

生物安全

实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒台面及仪器；

废弃物按生物危害物处理。

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