操作要点:

电泳条件:使用15% SDS-PAGE凝胶,以提高对小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
转膜参数:采用湿转法,100 V、60–90分钟(4°C),使用PVDF膜(需甲醇预活化)。
抗体选择:
一抗:抗CST3多克隆抗体(如兔源抗体),推荐稀释比为1:1000。
二抗:HRP标记的山羊抗兔IgG,稀释比1:10,000。
显色方式:ECL化学发光法,预期条带位于~13.4 kDa处。
内参建议:由于CST3分子量较小,可选用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作为内参,避免条带重叠。
产品概述:

Recombinant Human Granzyme A(重组人颗粒酶A)是通过基因工程技术生产的、与天然人源颗粒酶A结构功能相似的丝氨酸蛋白酶,作为一种关键的免疫效应分子,被广泛用于研究细胞毒性淋巴细胞介导的细胞死亡(如焦亡)、抗肿瘤免疫机制及炎症反应的科研领域。
产品名称; Recombinant Human Granzyme A
别名; CTL tryptase, CTLA3, Cytolytic t cell and natural killer cell specific trypsin like serine protease, Cytotoxic T lymphocyte associated serine esterase 3, Cytotoxic T lymphocyte proteinase 1, Cytotoxic T-lymphocyte proteinase 1, Fragmentin 1, Fragmentin-1, GRAA_HUMAN, Granzyme 1 cytotoxic T lymphocyte associated serine esterase 3, Granzyme A, Granzyme A (Cytotoxic T lymphocyte associated serine esterase 3
宿主; E.Coli
表达区间; 29-262
分子量; 25.6 kDa
标签; N-terminal His Tag
纯度; Greater than 95% by SDS-PAGE gel analyses
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
使用说明:

复溶方法: 使用无菌蒸馏水或PBS缓冲液(pH 7.4)溶解冻干粉,轻轻混匀至完全溶解。
应用建议:
实验用途: 适用于Western Blot、ELISA等检测,作为抗原或标准品。
浓度调整: 根据实验需求稀释,避免高浓度导致非特异性结合。
安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜,遵循实验室生物安全规范。
重组表达原理:

基因克隆:从牛基因组中获取CST3基因的编码序列(对应氨基酸31–148),插入含有启动子、筛选标记和His标签序列的质粒载体。
宿主表达:将重组质粒转化至E. coli(如BL21菌株),在IPTG诱导下启动蛋白表达。该系统成本低、表达效率高,适合大规模生产。
蛋白纯化:利用His标签与镍柱亲和层析结合,实现高纯度(>95%)蛋白回收,再经透析或凝胶过滤去除杂质。
冻干保存:加入海藻糖作为保护剂,冻干后可长期稳定储存,复溶后保持天然构象和生物活性。
公司正在出售的产品:

铜代谢结构域蛋白8 | 水样品内毒素浊度法定量酶联免疫试剂盒 |
连接粘附分子2 | PRONASE酶解法石蜡切片抗原修复处理试剂盒 |
蛋白制备试剂专题 | 细胞(THROMBIN)活性荧光定量酶联免疫试剂盒 |
血液亚硝酸盐含量荧光定量pcr检测试剂盒 | 细胞/组织白蛋白载玻片制备试剂盒 |
细胞色素P450酶(CYP-ECOD)总活性荧光定量pcr检测试剂盒 | β-抑制蛋白1/2抗体 |
骨髓基质干细胞抗原1 | HMBOX1蛋白抗体 |
BAX蛋白表达ELISA定量pcr检测试剂盒 | 组织IRAK1激酶活性定量pcr检测试剂盒(A/B/C) |
饮料甘素(dulcin)含量薄层色谱法定性pcr检测试剂盒 | 动物细胞/组织释放凋亡pcr检测试剂盒 |
猪细小病毒VP2蛋白 | FAM83G蛋白抗体 |
间隙连结蛋白31.9 | 膜相关环指蛋白10抗体 |
PE标记人CD152单克隆 | 碘酪氨酸脱碘酶抗体 |
组织HSV1(HERPES SIMPLX1)病毒定量PCR扩增pcr检测试剂盒 | Recombinant Human Granzyme A抑癌蛋白TCHP抗体 |
AF555标记的网格蛋白重链抗体 | APC标记人CD18单克隆抗体 |
重组蛋白生产流程:

通常包括以下几个核心步骤:
基因克隆:首先,科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列(目的基因)。
构建载体:将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中,这个载体就像是一个运输工具,
能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。
转入宿主:将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中,这个过程称为“转化”或“转染”。
表达与培养:宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养,其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息,开始大量生产目标蛋白。
纯化:通过一系列复杂的生物化学方法(如层析技术),将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来,以获得高纯度的产品。
关键字: Granzyme A;25.6 kDa; 29-262;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
西格生物专注于实验室和公共卫生领域,利用互联网、数据分析及自动化技术,包括实验室固定资产、仪器设备、生物样本、化学品、试剂、配件耗材、环境、仪器自动化和高通量筛选等一体化综合管理平台。不断为各行业实验室细胞生命学产品、技术服务、免疫学和分子学产品,截止至2024年5月,西格生物已为生命科学、检验检测、化工材料、科研院所、政府机构多行业300余家知名客户提供实验室完整解决方案。本着帮助用户实现“让科研场所更智能、让科研人员更专注、让科学服务更高效“的愿景,西格生物将继续在实验室科研产品领域持续发力,更加重视本土化,建构通用性高、适应性好、模块搭配灵活,能快速响应客户需求的产品。