产品介绍:
该试剂盒主要用于草鱼养殖业中,针对草鱼出血病III型病毒(Grass Carp Reovirus III, GCRV III)的特异RNA片段进行快速扩增与检测。GCRV是严重危害草鱼养殖的病毒性病原,该试剂盒基于恒温荧光检测技术,可实现对草鱼组织、苗种及养殖水体中病毒的快速筛查,为疾病的早期诊断和防控提供可靠工具。
产品名称 | 草鱼出血病III型病毒(GCRV III)RNA核酸检测试剂盒(恒温荧光法) | 货号 | AP3520 |
产品分类 | 荧光PCR | 规格 | 50T |
�� 病毒背景与检测意义
病原简介:草鱼出血病病毒(GCRV)属于呼肠孤病毒科,是一种双链RNA病毒。根据基因型差异,主要分为I型、II型和III型(也称GCRV-HZ08株系)。
危害特征:
高致死率:主要感染草鱼(尤其是鱼种和成鱼),病程急,死亡率可高达50%-90%。
典型症状:病鱼表现为全身性出血(肌肉、鳃盖、鳍条、肠道等),肝脏肿大出血,脾肾肿大等。
流行季节:主要流行于水温20-30℃的春末夏初和秋季。
传播途径:主要通过带毒苗种、污染水体进行水平传播,也可通过亲鱼进行垂直传播。
�� 检测原理与核心优势
该试剂盒采用的是恒温荧光检测技术(通常为RT-LAMP原理)。
核心原理:针对GCRV III型病毒基因组中高度保守的RNA片段(如VP38外壳蛋白基因或S10基因片段)设计特异性引物。在恒温条件下(通常为60℃-65℃),首先通过逆转录酶将病毒RNA反转录成cDNA,随后利用链置换DNA聚合酶对目标片段进行指数级扩增。随着DNA的合成,反应体系中的荧光染料(如SYTO-9)嵌合到双链DNA中发出荧光,仪器实时监测荧光信号的变化,从而实现对病毒RNA的定性检测。
自动判读:仪器会根据荧光曲线的拐点(Tt值)自动判读结果。
主要优势:
操作快速:整个检测过程通常仅需45-60分钟,无需复杂的热循环。
高灵敏度:检出限可达10³ copies/μL,能够检测出极低含量的病毒。
高特异性:引物针对GCRV III型特有序列设计,与其他常见鱼类病原(如鲤春病毒血症病毒、弹状病毒等)无交叉反应。
设备便携:仅需恒温荧光检测仪(如Genie系列、DHelix等),适合养殖场现场快速筛查。
�� 产品性能指标
根据相关产品信息(如分析测试百科网等),该试剂盒通常具备以下指标:
指标项目 性能参数参考
检测范围 1×10³ ~ 1×10⁸ 拷贝/毫升 (Copies/mL)
最低检测限 10³ copies/μL
反应时间 45 min
反应温度 63℃ ± 1℃
适用仪器 Genie II, Dhelix-C, ESE Tube Scanner, Deaou-308C等恒温荧光检测仪
适用样本 草鱼组织(肝、脾、肾、鳃)、血淋巴、苗种、养殖水体等
�� 主要组分与储存
试剂盒通常包含以下组分(以48T规格为例):
反应液 (A-GCRV III-I):含有dNTPs、缓冲液、Mg²⁺等。
酶液 (B-I):含有逆转录酶、Bst DNA聚合酶等。
阳性对照 (PG-GCRV III-I):含有GCRV III型病毒基因片段的质粒或灭活病毒液。
阴性对照 (NG-I):灭菌纯水。
储存条件:所有组分应于 -20℃ 条件下避光保存,有效期通常为 12个月。运输过程需使用干冰或冰袋,避免反复冻融。
�� 标准操作流程
样本处理与RNA提取
采集待检测的草鱼组织(如肝、脾)或水体样本。
使用TRIzol法或商品化的RNA提取试剂盒,提取样本的总RNA作为模板。
试剂准备
将试剂从-20℃取出,室温平衡10分钟,完全解冻。
涡旋混匀各组分,并瞬时离心。
反应体系配置
在冰上操作,按说明书比例配制反应体系(通常为25 μL)。
将配制好的反应液分装至PCR管中。
上机扩增与检测
将配置好的反应管放入恒温荧光检测仪中。
设置反应温度为63℃,反应时间为45 min。
仪器实时监测荧光信号变化,并自动判读结果。
结果判读
阳性:荧光曲线呈典型的“S”型增长,且Tt值(Threshold Time)≤ 45 min。
阴性:荧光曲线为直线或轻微斜线,无“S”型扩增曲线,或Tt值无定义。
⚠️ 注意事项
防止污染:实验应严格分区(试剂准备区、样本制备区、扩增区),避免气溶胶污染。
操作规范:试剂配制和加样步骤建议在冰上进行,避免酶活性损失。反应液对光敏感,应避光保存和使用。
质控要求:每次实验必须设置阴性对照(无模板)和阳性对照。若阴性对照出现阳性扩增或阳性对照无扩增,则本次实验结果无效。
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注意事项
防污染操作
需在试剂准备区、样本处理区、扩增区独立操作,使用带滤芯吸头及专用实验服。
阳性对照管理
浓度高达1×10⁸拷贝/μL,需单独存放并避免污染其他试剂。
局限性
仅限科研使用,不可用于临床诊断;
环境样本中可能存在PCR抑制剂,需设置内参对照。
关键字: 草鱼出血病III型病毒 ;GCRV IIIRNA ;恒温荧光法;核酸检测试剂盒;
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