重组蛋白生产流程:
通常包括以下几个核心步骤:
基因克隆:首先,科学家需要获取编码目标蛋白的特定基因序列(目的基因)。
构建载体:将目的基因插入到一个被称为“载体”的DNA分子中,这个载体就像是一个运输工具,
能将目的基因送入宿主细胞并指导其表达。
转入宿主:将构建好的重组载体导入选定的宿主细胞中,这个过程称为“转化”或“转染”。
表达与培养:宿主细胞在适宜的条件下进行大规模培养,其自身的遗传系统会读取重组载体上的基因信息,开始大量生产目标蛋白。
纯化:通过一系列复杂的生物化学方法(如层析技术),将目标重组蛋白从宿主细胞的众多混合物中分离出来,以获得高纯度的产品。
产品概述:
该蛋白是一种胞质代谢酶,属于甲基转移酶家族。其核心功能是利用S-腺苷甲硫氨酸(SAM)作为甲基供体,催化烟酰胺(NAM)发生N-甲基化反应,生成1-甲基烟酰胺(1-MNA)和S-腺苷同型半胱氨酸(SAH)。这一过程不仅消耗了细胞内的关键甲基供体SAM,影响DNA、RNA及组蛋白的甲基化修饰(如导致H3K27me3低甲基化),从而引发表观遗传重编程;同时也干扰了NAD⁺的补救合成途径。NNMT在肝脏中高表达,参与药物和异生物质的代谢解毒。
产品名称; Recombinant Human NNMT
别名; EC 2.1.1.1, Nicotinamide N methyltransferase, Nicotinamide N-methyltransferase, NNMT, NNMT_HUMAN
宿主; E.Coli
表达区间; 1-264
分子量; 28.9 kDa
标签; N-terminal His Tag
纯度; Greater than 95% as determined by SDS-PAGE
应用; Western Blot, ELISA
性状; Lyophilized from a 0.2 μm filtered solution in 10 mM Hepes, 500 mM NaCl with 5% trehalose, pH7.4
溶解方法; Centrifuge the vial at 10,000 rpm for 1 minute, reconstitute at 200 μg/ml in sterile distilled water by gentle pipetting 2-3 times, don’t vortex
存储; The lyophilized protein is stable at -20 °C for up to 1 year. For extended storage, it is recommended to further dilute in working aliquots after reconstitution. The protein solution is stable at ≤ -20 °C for 3 months, or 2-7 days at 2-8 °C under sterile conditions.Avoid repeated freeze/thaw cycle.
操作要点:
电泳条件:使用15% SDS-PAGE凝胶,以提高对小分子量蛋白(~13.4 kDa)的分辨率。
转膜参数:采用湿转法,100 V、60–90分钟(4°C),使用PVDF膜(需甲醇预活化)。
抗体选择:
一抗:抗CST3多克隆抗体(如兔源抗体),推荐稀释比为1:1000。
二抗:HRP标记的山羊抗兔IgG,稀释比1:10,000。
显色方式:ECL化学发光法,预期条带位于~13.4 kDa处。
内参建议:由于CST3分子量较小,可选用GAPDH(~37 kDa)或β-actin(~42 kDa)作为内参,避免条带重叠。
注意事项:
安全提示: 操作时需佩戴手套和护目镜,遵循实验室生物安全规范。
安全提示:仅限研究使用,避免接触临床样本;操作时需佩戴防护装备。
质量控制:产品纯度通过SDS-PAGE验证,确保生物活性稳定;避免使用含硫柳汞等有毒物质的试剂。
兼容性:适用于多种实验体系,但需优化浓度以避免非特异性结合。
公司正在出售的产品:
通用转录因子2H亚基2C | 冰冻切片半胱(CASPASE)总活性原位荧光染色酶联免疫试剂盒 |
ENOX1蛋白 | 比色法定量酶联免疫试剂盒 |
隐孢子虫(Cryptosporidium)涂片施乐-尼尔森(Zielh-Nielson)染色试剂盒 | 冰冻切片组织RyR受体蛋白表达荧光显微镜酶联免疫试剂盒 |
非吸烟者人体肺组织微粒体组分(5毫克/毫升) | 植物N-糖基糖蛋白树脂法纯化试剂盒 |
组织基质金属(MMP-10)活性荧光定量pcr检测试剂盒 | 氯胺酮单克隆抗体 |
海马丰富基因转录蛋白1 | 蛋白聚糖Versican抗体 |
P21蛋白表达西方杂交分析试剂盒 | 石蜡切片糖原高碘酸希尔(PAS)法染色试剂盒 |
糖蛋白胶回收试剂盒 | 组蛋白脱乙酰化酶2(HDAC2)活性比色法定量pcr检测试剂盒 |
周期素依赖性激酶PCTAIRE1 | 阳离子通道精子相关蛋白4抗体 |
肌微管素相关蛋白6 | ADP核糖基化因子相关蛋白1 |
PE标记人/小鼠ZAP-70单克隆 | 磷酸化Rho相关蛋白激酶1抗体 |
AF405标记的磷酸化表皮生长因子受体 | Recombinant Human NNMT白细胞F肌动蛋白结合蛋白抗体 |
产气荚膜梭菌肠毒素(Clostridium perfringens cpe)鉴定16S rDNA PCR扩增检测试剂盒 | HD域内含蛋白2抗体 |
关键字: NNMT;28.9 kDa; 1-264;
上海西格生物有限公司于2019年6月18日成立。
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