大豆根瘤菌 新品

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产品描述：

大豆根瘤菌（Bradyrhizobium japonicum）是慢生根瘤菌属的一种革兰氏阴性需氧杆菌，能与大豆等豆科植物形成共生固氮体系。该菌可通过根毛侵入大豆根部，诱导根瘤形成，在根瘤内将空气中的氮气转化为氨，为大豆提供氮源，促进大豆生长，提高产量。大豆根瘤菌的固氮效率受环境因素和菌株特性影响，通过筛选高效固氮菌株、优化接种技术等手段，可提高大豆的固氮能力，减少化肥使用，实现农业可持续发展。
培养基  根瘤菌培养基（英文名：YMA）：K2HPO4 0.5 g,MgSO4·7H2O 0.2 g,NaCl 0.1 g,酵母提取物 1.0 g,甘露醇 10.0 g,刚果红0.025g，琼脂 15.0 g,蒸馏水 1.0 L,pH 7.2±0.2。121℃，30min灭菌。

生长条件  30℃；3-4天；好氧；

存储条件  2-8℃

安全等级  1

形态  菌落直径为0.5-1mm，圆形，边缘整齐，半透明，正面灰白色，中间凸起，表面明亮，质地黏稠，G－（红），杆菌，纯度：纯

模式菌株  no

操作步骤  ①准备2个平板；②安全柜中打开，用酒精灯灼烧顶部，后迅速滴上无菌水使之破裂，随后用镊子将其敲碎；③吸取0.5mL无菌水打入冻干管，充分，混匀；④吸取0.2mL菌悬液打入平板中，涂布均匀，重复两次获得两个平板；⑤将平板全部置于上述培养条件下培养，菌种长出即可使用。

共享方式  公益性共享

菌种活化流程：

1. 冻干菌种活化

超净台紫外消毒 30 min，75% 酒精擦拭菌种管外壁

无菌打开冻干管，加入0.5–1 mL 无菌液体培养基，轻轻吹打溶解，室温静置 15–20 min 复苏

取全部菌液，划线接种斜面或涂布 平板

30℃恒温培养 5–7 天，至长出灰色孢子菌落

2. 甘油管 / 斜面活化

甘油管冰上缓慢解冻；斜面直接无菌操作

无菌接种环挑取菌体 / 孢子，划线分离单菌落于平板

30℃培养 5–7 天，挑取典型单菌落转接斜面，作为工作种子

3. 孢子悬液制备（发酵用）

成熟斜面加入5–10 mL 无菌 0.85% 生理盐水，轻轻刮下孢子

用无菌脱脂棉 / 玻璃珠过滤，去除菌丝，制成孢子悬液（浓度 10⁶–10⁸ CFU/mL）

4℃短期保存，或用于接种发酵培养基

菌种保存：

1. 短期保存

固体斜面/半固体：将生长良好的菌种置于 4℃ 冰箱。一般可保存数周至数月，需定期传代。

2. 长期保存

冷冻保存法（最常用）：

配制保护剂：常用 20-30% 无菌甘油。

收集菌体：刮取新鲜培养的菌苔或菌液，与保护剂混合，使菌悬液浓度达到较高密度。

分装：分装至无菌冻存管中（每管0.5-1 mL），拧紧盖子。

冷冻：置于 -80℃ 超低温冰箱或液氮中。

冻干保存法：需使用冷冻干燥机，适合长期保藏。

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