人直肠平滑肌细胞
产品信息:

英文名称 | Human Rectal Smooth Muscle Cells | 种属 | 人 |
产品规格 | 5×10^5Cells/T25 | 货号 | A01X1306 |
组织来源 | 直肠组织 | 生长特性 | 贴壁 |
细胞简介:

人直肠平滑肌分离自直肠组织;直肠为大肠的未段,位于小骨盆内。上端平第3骶椎处接续乙状结肠,沿骶骨和尾骨的前面下行,穿过盆膈,下端以而终。直肠上端的大小似结肠,其下端扩大成直肠壶腹,是粪便排出前的暂存部位,下端变细接管。直肠在盆腔内的位置与骶椎腹面关系密切,与骶椎有相同的曲度。直肠周围多脂肪、无纵带,位于膀胱和生殖器官的背侧。直肠平滑肌细胞原代分离培养3天后,可见细胞贴壁伸展,细胞形态大小不一,呈梭形、不规则形、三角形或扇形,核卵圆形、居中;2周后细胞汇合,多数细胞伸展呈长梭形,胞浆丰富,有分枝状突起,细胞平行排列成单层或部分区域多层重叠生长,高低起伏;细胞密度低时,常交织成网状;密度高时,则排列为旋涡状或栅栏状。传代后细胞生长较快,4-6天即可汇合,并保持上述形态学特征和生长特点。直肠的动脉血供主要是来自肠系膜下动脉的直肠上动脉,来自髂内动脉的直肠中动脉和来自髂内动脉的直肠下动脉。平滑肌收缩是胃肠蠕动中基本的运动方式;肠炎时由于平滑肌特殊肌动蛋白的增加导致了平滑肌层的增厚。平滑肌肌动蛋白可能影响收缩力的产生,这进一步证明了炎症时的肠平滑肌细胞具有可塑性。利用肠平滑肌细胞的培养,可以帮助了解收缩、增殖和胃肠道结缔组织对平滑肌细胞的反应。
方法简介 公司实验室分离的人直肠平滑肌采用-胶原酶联合消化法结合差速贴壁法制备而来,细胞总量约为5×10?cells/瓶。
质量检测 公司实验室分离的人直肠平滑肌经α-SMA免疫荧光鉴定,纯度可达90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。
培养信息:

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等
换液频率 每2-3天换液一次
生长特性 贴壁
细胞形态 成纤维细胞样
传代特性 可传5代左右;3代以内状态佳
消化液 0.25%
培养条件 气相:空气,95%;CO2,5%
关键操作技巧与注意事项:

成功的原代培养依赖于严谨的细节控制:
严格无菌操作:这是实验成功的基石。所有操作需在生物安全柜中进行,试剂和耗材必须无菌。
保持静置:细胞接种后的最初24-48小时内,应保持培养瓶绝对静置,避免频繁取出观察或晃动,这有助于细胞贴壁和伸展。
优化消化过程:
消化时间要恰到好处,过长会损伤细胞,过短则细胞分散不佳。
胶原酶对组织的损伤较小,常用于分离活性要求高的细胞;胰蛋白酶作用较强,需严格控制时间。
酶液应新鲜配制,避免活性下降。
控制接种密度:原代细胞在低密度下不易存活,建议适当提高初始接种密度,以保证细胞间的相互作用促进其生长。
定期换液:根据培养基颜色变化(如变黄)或每隔2-3天更换一次培养液,以清除代谢废物并补充营养。
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细胞培养操作

消化培养法
此方法利用酶(如胰蛋白酶、胶原酶)将组织分散成单个细胞或细胞团,形成细胞悬液进行培养,细胞生长较快。
取材与剪切
同样在无菌条件下获取组织,并用Hanks液清洗干净。
将组织剪切成更小的碎块(约 1 mm³),以便酶更好地发挥作用。
酶消化
将组织块转移至容器中,加入适量的酶消化液(如0.25%胰蛋白酶)。
在 37℃ 条件下消化 20-40分钟,期间可适当摇动或吹打。消化程度需在显微镜下观察,当组织分散成细胞团或单个细胞时,立即终止消化。
终止与洗涤
加入含血清的培养液以终止酶的消化作用(血清可抑制胰蛋白酶活性)。
将细胞悬液通过筛网过滤,除去未消化的组织块。然后以 1000 rpm 离心 5-10分钟,弃去上清液。
接种与培养
用适量新鲜培养液重悬细胞沉淀,进行细胞计数,并调整细胞密度至实验所需浓度(例如 5×10⁵ cells/mL)。
将细胞悬液分装至培养瓶中,放入 37℃、5% CO₂ 培养箱中静置培养。
关键字: 人直肠平滑肌细胞;直肠组织;贴壁;
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