寨卡病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒用于体外定性检测人血清、血浆或尿液样本中的寨卡病毒RNA，适用于临床辅助诊断及流行病学监测。检测结果需结合临床症状及其他实验室指标综合判断。

检测原理

核酸逆转录（RT）：试剂盒中的逆转录酶将病毒RNA逆转录为cDNA。

荧光定量PCR扩增：

引物设计：针对寨卡病毒高度保守的NS5或E基因区域设计特异性引物。

探针技术：采用TaqMan探针，5'端标记报告荧光基团（如FAM），3'端标记淬灭基团。扩增过程中，Taq酶水解探针释放荧光信号，实时荧光PCR仪监测信号强度，定量分析病毒载量。

试剂盒组成

RT-PCR反应混合液：含逆转录酶、Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液、特异性引物及探针。

阳性对照：寨卡病毒RNA片段。

阴性对照：无RNA酶水。

其他辅助试剂：核酸提取试剂（需另购或按配套说明使用）。

操作流程

样本处理：

采集血清、血浆或尿液，避免溶血或反复冻融。

核酸提取：

使用商业化病毒RNA提取试剂盒，严格分区操作防止污染。

反应体系配制：

按比例混合RT-PCR反应液、模板RNA及对照品，避光操作。

扩增与检测：

将反应管置于实时荧光PCR仪，设置程序：

逆转录：50°C 15分钟

预变性：95°C 3分钟

扩增循环：95°C 15秒 → 60°C 1分钟（40个循环）

结果判读：

仪器自动分析扩增曲线及Ct值，阴性/阳性判断需符合试剂盒阈值标准。

注意事项

样本要求：新鲜样本需在24小时内提取RNA，长期保存应置于-80°C。

防污染措施：

实验分区操作（样本处理、试剂配制、扩增区分离）。

使用一次性耗材，穿戴防护装备。

工作台及仪器需用10%次氯酸或75%乙醇消毒。

质量控制：每批次检测需包含阴/阳性对照，结果无效需复检。

局限性

检测灵敏度受样本质量、提取效率及操作影响。

不可区分寨卡病毒亚型或与其他黄病毒属交叉反应（如登革热病毒），需结合临床症状鉴别。

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