刚果嗜皮菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 刚果嗜皮菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Dermatophilus congolensis Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4027 |
产品用途
本试剂盒基于SYBR Green荧光染料法，用于快速、特异性地检测动物组织、皮肤痂皮、脓液或环境样本中的刚果嗜皮菌核酸。适用于兽医临床诊断、流行病学调查及病原监测。
检测原理
特异性引物：靶向刚果嗜皮菌保守基因（如16S rRNA或gyrB基因），避免交叉反应。
SYBR Green染料：实时结合双链DNA产物，释放荧光信号。
qPCR扩增：通过循环阈值（Ct值）定量病原DNA载量。
试剂盒组成
| 成分 | 规格（50次） | 保存条件 |
| qPCR Master Mix | 1 mL | -20℃ |
| DC 特异性引物混合液 | 100 μL | -20℃ |
| 阳性对照（DC DNA） | 50 μL | -20℃ |
| 阴性对照（无核酸水）| 1 mL | -20℃ |
| RNase-Free水 | 1 mL | 室温 |
样本要求
样本类型：病变皮肤刮取物、痂皮（需研磨）、脓液、组织匀浆液。
核酸提取：推荐使用商用DNA提取试剂盒（如QIAamp DNA Mini Kit）。
DNA浓度：建议10–100 ng/μL，OD260/280=1.8–2.0。
检测步骤
1. 反应体系配制（20 μL/反应）
| 组分 | 体积 |
| qPCR Master Mix | 10 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| 模板DNA | 2 μL |
| RNase-Free水 | 6 μL |
2. qPCR程序（推荐）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 0.5℃/5s | 1 |
结果判读
阳性：Ct值 ≤ 35，且熔解曲线出现单一特异峰（Tm ≈ 82–85℃）。
阴性：无Ct值或Ct值 > 38，熔解曲线无主峰。
可疑：Ct值 35–38，需重复检测。
注意：阴性/阳性对照必须符合预期，否则实验无效。
性能参数
灵敏度：最低检出限 10拷贝/反应
特异性：不交叉反应与链球菌、葡萄球菌、真菌等常见皮肤病原体
重复性：批内/批间变异系数（CV）< 5%
局限性
样本中PCR抑制剂可能导致假阴性。
仅检测核酸存在，不区分病原体活性。
突变可能导致假阴性（概率<0.1%）。
储存与运输
储存：-20℃避光保存（避免反复冻融），有效期12个月。
运输：冰袋（-4℃）或干冰。
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