改良安卡拉痘苗病毒染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 改良安卡拉痘苗病毒染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Modified Ankara Vaccinia Virus Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4031 |
检测原理
本试剂盒基于SYBR Green I荧光染料法，通过实时荧光定量PCR技术检测改良安卡拉痘苗病毒（Modified Vaccinia Virus Ankara, MVA）的DNA含量。SYBR Green I可特异性结合双链DNA，在扩增过程中释放荧光信号，通过监测荧光强度实现病毒核酸的定量分析。
产品组成
PCR反应液：含优化引物对（针对MVA高度保守区设计）、SYBR Green I荧光染料、dNTPs、Taq DNA聚合酶及反应缓冲液。
阳性对照：含MVA靶序列的重组质粒标准品（已知浓度梯度）。
阴性对照：无核酸酶水（ddH2O）。
技术特点
高灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的病毒DNA。
强特异性：引物经严格筛选，避免与其他病毒DNA交叉反应。
重复性好：批内及批间变异系数（CV）≤5%。
操作简便：预混反应体系，仅需加入模板DNA即可进行检测。
保存与运输
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
运输方式：低温干冰运输，避免反复冻融。
实验步骤
模板制备：提取待测样品DNA，建议使用柱式核酸提取试剂盒。
反应体系配制：按20μL/反应加入PCR反应液、模板DNA及对照品。
扩增程序：
预变性：95℃ 3分钟；
循环阶段（40 cycles）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
数据分析：
定量检测：以阳性对照log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样品病毒载量。
定性检测：
阴性：Ct≥40或无扩增曲线；
阳性：Ct≤35且曲线呈典型S型；
可疑（35<Ct<40）：需复测，复测Ct<40判为阳性。
注意事项
实验需在无菌环境下操作，避免污染。
建议使用ROX参比染料校正孔间荧光偏差（需自备）。
若检测环境存在气溶胶污染，建议使用UDG酶防污染体系。
质量控制
阴性对照Ct值应≥40，阳性对照Ct值≤30且扩增曲线明显。
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