卟啉单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 卟啉单胞菌通用染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Porphyromonas spp. Universal Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4033 |
产品概述
本试剂盒为即用型荧光定量PCR检测系统，采用SYBR Green I染料法，专为卟啉单胞菌（如牙龈卟啉单胞菌）的核酸定量检测设计。试剂盒包含优化的预混体系，整合反转录（RT）与定量PCR（qPCR）步骤，适用于RNA或DNA模板的高灵敏度检测，可广泛应用于科研领域。
检测原理
染料法荧光检测：SYBR Green I染料与双链DNA结合后发射荧光信号，通过实时监测荧光强度实现靶标定量。
高特异性引物：针对卟啉单胞菌保守序列设计引物，避免与其他微生物交叉反应。
一体化反应：单管完成反转录与扩增，减少操作步骤和污染风险。
试剂盒组分
2×预混缓冲液：含dNTPs、Mg²⁺、反应缓冲液及SYBR Green I染料。
酶混合液：耐热逆转录酶（RTase）和热启动Taq DNA聚合酶。
阳性对照：卟啉单胞菌标准品（1×10⁷拷贝/μL）。
核酸稀释液：无RNase/DNase超纯水。
使用手册（含标准曲线构建方法）。
自备材料
样本DNA/RNA提取试剂（推荐柱式纯化试剂盒）。
荧光定量PCR仪（兼容SYBR Green通道）。
无菌PCR管及移液耗材。
操作步骤
样本制备：
使用核酸提取试剂盒提取样本RNA/DNA，建议用超纯水溶解至终浓度≥10 ng/μL。
反应体系配制（20 μL体系）：
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×预混缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 0.5 |
| 引物干粉（用户自加）| 0.4（10 μM）|
| 模板RNA/DNA | 2 |
| 超纯水 | 至20 |
反应程序：
反转录：42℃ 15分钟（RNA样本需此步骤）。
预变性：95℃ 3分钟。
扩增（40循环）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光信号）。
熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5秒。
性能参数
灵敏度：可检测低至0.1 pg RNA或单拷贝DNA。
线性范围：10¹~10⁷拷贝/μL（R²≥0.99）。
保存条件：-20℃避光保存，有效期24个月；预混液4℃稳定24小时。
注意事项
操作需在无菌环境下进行，避免核酸污染。
熔解曲线需呈现单一峰形，否则提示非特异性扩增。
本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。
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