预期用途
本试剂盒基于SYBR Green I 荧光染料法，用于定量检测人血清或血浆样本中乙型肝炎病毒（HBV）D基因型的DNA载量。适用于：
HBV感染者的病毒载量监测
D基因型HBV感染的辅助诊断
抗病毒疗效评估
疾病进展及预后判断
注意：本试剂盒不适用于血源筛查，检测结果需结合临床表现及其他诊断指标综合判断。
产品名称 | 乙型肝炎病毒D型染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Hepatitis B Virus Genotype D Dye-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR3945 |
检测原理
核酸提取：采用磁珠法/柱提法从样本中提取HBV DNA。
PCR扩增：
使用特异性引物靶向HBV D基因型保守区域（如Pre-S/S、C区）。
加入SYBR Green I 荧光染料，实时监测扩增过程中双链DNA产物生成量。
定量分析：
通过标准曲线将Ct值转换为病毒拷贝数（copies/mL）或国际单位（IU/mL）。
试剂盒组分
| 组分名称 | 规格（96T） | 储存条件 |
| HBVD qPCR 反应液 | 1.2 mL × 1管 | -20℃避光 |
| HBVD 酶混合液 | 150 μL × 1管 | -20℃ |
| HBVD D型阳性标准品 | 5×10^1~5×10^6 IU/mL 梯度 6管 | -70℃以下 |
| 阴性对照 | 1 mL × 1管 | -20℃ |
| DNase/RNase-Free 水 | 1 mL × 1管 | 室温 |
储存及稳定性
未开封试剂：-20℃避光保存，有效期12个月。
开封后试剂：反应液与酶混合液需于-20℃分装保存，避免反复冻融（≤3次）。
样本要求
样本类型：血清、EDTA或枸橼酸钠抗凝血浆。
采集与保存：
采集后2小时内分离血清/血浆，2~8℃保存≤72小时；
长期保存需-70℃以下冻存，避免反复冻融。
样本量：≥200 μL。
检测流程
核酸提取：按配套提取试剂盒操作，洗脱体积50-100 μL。
PCR反应体系配制（20 μL体系）：
| 组分 | 体积 |
| qPCR 反应液 | 10 μL |
| 酶混合液 | 2 μL |
| 模板DNA | 5 μL |
| DNase-Free 水 | 补足至20 μL |
扩增程序（以ABI 7500为例）：
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |
| 预变性 | 95℃ | 5 min | 1 | 否 |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 sec | | 是 |
| 熔解曲线 | 60℃→95℃ | 0.3℃/sec | 1 | 是 |
结果判读
阴性对照：Ct值≥38或无扩增曲线。
阳性对照：Ct值≤35，且标准曲线R²≥0.98。
样本判定：
阳性：Ct值≤38，熔解曲线Tm值符合预期（如80-85℃）；
阴性：无Ct值或Ct值>38。
定量计算：仪器软件自动生成病毒载量（IU/mL）。
性能参数
灵敏度：≤20 IU/mL
线性范围：10^2 ~ 10^8 IU/mL
特异性：
不与A/C型HBV、HCV、HIV等常见病原体交叉反应；
熔解曲线分析确保扩增特异性。
精密度：批内/批间CV ≤ 5%。
注意事项
实验区严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。
穿戴一次性防护装备，样本按生物危险品处理。
试剂使用前完全解冻并混匀，避免气泡。
熔解曲线出现多峰提示非特异性扩增，结果无效需复测。
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