检验原理
本试剂盒采用SYBR Green染料法实时荧光定量PCR技术,针对鲤疱疹病毒3型(CyHV-3)Sph基因的高度保守区域设计特异性引物。在PCR扩增过程中,SYBR Green染料与双链DNA结合释放荧光信号,通过仪器实时监测荧光强度变化,实现对病毒核酸的定性和定量分析。
产品名称
鲤疱疹病毒3型染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Cyprinid Herpesvirus 3 (CyHV-3) Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR3964
主要组分
PCR MagicMix 3.0(含Taq酶、dNTPs、缓冲液及SYBR Green染料)
超纯水(无核酸酶)
CyHV-3 Sph基因特异性引物混合液
阳性对照(1×10^8 拷贝/μL,需单独存放)
核酸释放剂(可选用于样本前处理)
使用手册
操作步骤
反应体系配制(建议冰上操作):
每40μL反应体系含:
PCR MagicMix 3.0:20μL
引物混合液:2μL
待测DNA模板:5μL
超纯水:补足至40μL
阳性对照需单独设置反应管。
扩增程序(以常见仪器为例):
预变性:95℃ 5分钟
循环阶段(40个循环):
变性:95℃ 15秒
退火/延伸:60℃ 30秒(此阶段采集荧光信号)
熔解曲线分析(可选):60℃~95℃逐步升温,验证扩增特异性。
结果判读:
阳性:Ct值≤35,且熔解曲线呈现单一峰值;
可疑:35<Ct值<40,建议重复检测;
阴性:无扩增曲线或Ct值≥40。
注意事项
试剂需-20℃保存,避免反复冻融;
阳性对照需与其他组分分开放置,防止污染;
操作时需穿戴防护装备,避免核酸交叉污染;
本产品仅限科研使用,不适用于临床诊断。
性能参数
灵敏度:可检测低至10拷贝/μL的CyHV-3核酸;
特异性:与常见水生动物病原体无交叉反应;
保存期限:12个月(-20℃避光)。
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