检验原理
采用特异性引物及荧光染料（如SYBR Green I），靶向肺炎克雷伯菌保守基因序列（如phoE或rpoB基因），通过实时荧光定量PCR技术检测病原体核酸。灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖10^1~10^6拷贝/μL，配套阳性对照（非传染性DNA片段）以排除假阴性。
产品名称
肺炎克雷伯菌染料法荧光定量PCR试剂盒
英文名称
Klebsiella pneumoniae Dye-based qPCR Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR3967
试剂盒组成
反应液：预混PCR缓冲液、dNTPs、荧光染料
酶混合液：热启动Taq DNA聚合酶
阳性质控品：肺炎克雷伯菌特异性DNA片段
阴性质控品：无核酸酶水
标准曲线样品（6梯度稀释，可选配）
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
安捷伦MX3000P/3005P
Bio-Rad CFX系列
Roche LightCycler 480
样本要求
样本类型：痰液、血液、脑脊液等临床样本或培养物
DNA提取：需自备DNA提取试剂盒，建议浓度≥10 ng/μL，OD260/280为1.7~2.0
操作步骤
试剂准备区
冰上解冻试剂，短暂离心后混匀。
按反应体系配制Master Mix（含反应液、酶液），分装至PCR管。
样本加样区
加入5 μL模板DNA（样本/阴阳性对照）。
扩增程序（以ABI 7500为例）：
预变性：95℃ 2分钟
40循环：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）
结果判读
定性分析：Ct值≤35且扩增曲线呈S型为阳性。
定量分析：通过标准曲线计算拷贝数。
注意事项
严格分区操作（试剂准备、样本处理、扩增区），避免污染。
阳性质控品需单独稀释，避免气溶胶扩散。
临床样本需符合生物安全规范，废弃物料需高压灭菌处理。
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