伪中间型葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

伪中间型葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

储存与运输

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。

运输条件：低温、避光冷链运输。

有效期：12个月。

产品组成

| 组分 | 体积/数量 | 用途 |

| 2× qPCR Master Mix | 1 mL | 含DNA聚合酶、dNTPs、Mg²⁺、缓冲液及荧光染料 |

| 伪中间型葡萄球菌引物混合液 | 100 μL | 特异性引物对 |

| 阳性对照（基因组DNA） | 50 μL | 验证反应体系有效性 |

| 无核酸酶水 | 1 mL | 反应体系配制 |

实验步骤

样本DNA提取

使用常规核酸提取试剂盒提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制（20μL体系）

2× qPCR Master Mix     10 μL  

引物混合液              2 μL  

模板DNA                 2 μL  

无核酸酶水              6 μL  

PCR扩增程序

预变性：95℃ 5 min

循环阶段（40 cycles）：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（荧光采集）

熔解曲线分析：60℃→95℃，每0.5℃升温5 sec

结果分析

定性检测：Ct值≤35且熔解曲线为单一峰值，判为阳性。

定量检测：通过标准曲线计算拷贝数（需用户自备梯度稀释标准品）。

注意事项

实验分区操作（样本制备区、反应配制区、扩增区），避免交叉污染。

阳性对照需单独存放，避免污染待测样本。

反复冻融可能降低试剂活性，建议分装保存。

性能参数

灵敏度：可检测低至10拷贝/μL的靶序列。

特异性：不与金黄色葡萄球菌等近缘种交叉反应。

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