中间葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 中间葡萄球菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Staphylococcus intermedius Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4077 |
产品概述
本试剂盒专为中间葡萄球菌（Staphylococcus intermedius）的快速、高灵敏度检测设计，采用染料法荧光定量PCR技术，适用于科研用途。试剂盒包含预混优化引物、反应体系及对照，可实现定性或定量分析，灵敏度达数百拷贝/反应。
产品特点
即开即用：用户仅需提供DNA模板，无需额外优化引物或反应条件。
高特异性：引物基于中间葡萄球菌保守序列设计，避免与其他病原体交叉反应。
灵敏度与线性范围：检测下限为几百拷贝/反应，定量线性范围覆盖5个数量级。
防污染设计：一管式闭盖检测，减少气溶胶污染风险。
标准化操作：50次20μL反应体系，兼容常见荧光定量PCR仪。
运输与保存
运输条件：低温运输（冰袋或干冰）。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。避免反复冻融。
自备试剂与仪器
DNA模板：需用户自行提取（推荐使用兼容的核酸提取试剂盒）。
ROX校正染料：根据机型需求准备10×ROX（参见仪器说明书）。
仪器：荧光定量PCR仪（需支持SYBR Green I通道）。
实验步骤
1. DNA提取
使用自选方法或兼容试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL，OD260/280比值1.8-2.0。
2. 反应体系配制（20μL/反应）
| 组分 | 体积（μL） |
| 2×PCR预混液 | 10 |
| 引物混合液 | 2 |
| DNA模板 | 2 |
| ddH₂O | 6 |
注：阳性对照与阴性对照需同步设置。
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度（℃） | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95 | 3 min | 1 |
| 变性 | 95 | 15 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60 | 30 sec | |
数据采集：退火/延伸阶段结束时采集荧光信号（SYBR Green I通道）。
数据分析
定量检测
以阳性对照浓度的log值为横轴，Ct值为纵轴绘制标准曲线。
通过待测样本Ct值推算DNA浓度（log值），反演实际浓度。
定性检测
阴性判定：Ct≥40或无扩增曲线。
阳性判定：Ct≤35且呈现典型S型扩增曲线。
灰区样本：Ct值35-40需重复检测，复测Ct<40判为阳性。
注意事项
实验分区操作：样本制备区、PCR反应配制区、扩增区需严格分离。
避免污染：使用无菌耗材，操作时更换手套。
质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。
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