枯草芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

枯草芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

枯草芽孢杆菌染料法荧光定量PCR试剂盒是专为枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）检测打造的科研级检测工具，基于SYBR Green染料法荧光定量PCR技术开发，具有操作便捷、特异性强、灵敏度高的显著优势。试剂盒采用即开即用设计，仅需提供样品DNA模板即可开展实验，既能实现定性阴阳性判断，也能完成病毒载量的精准定量，适用于食品微生物检测、环境微生物监测及疾病诊断等科研场景。

产品特点

即开即用：预混优化引物、荧光染料及反应体系，用户仅需提供DNA模板。

高灵敏度：检测下限可达100-1000拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^2-10^7拷贝/μL）。

高特异性：针对枯草芽孢杆菌保守序列设计引物，无交叉反应。

质控完善：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）和阴性对照，避免假阴性。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 | 保存条件 |

| 2×qPCR预混液 | 500 μL | -20℃ |

| 枯草芽孢杆菌引物混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 阳性对照DNA | 50 μL | -20℃ |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL | 4℃ |

操作步骤

1. 标准曲线制备

标记6管（7-2号），每管加45 μL稀释液。

梯度稀释阳性对照（10^8拷贝/μL起始），依次获得10^7-10^2拷贝/μL的6个浓度标准品。

2. 样品DNA制备

推荐使用商业核酸提取试剂盒，纯化后DNA建议浓度≥10 ng/μL。

3. qPCR反应设置

反应体系（20 μL）：10 μL预混液 + 2 μL引物混合液 + 2 μL模板 + 6 μL无核酸酶水。

循环条件：

预变性：95℃ 5 min

40循环：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集荧光）

数据分析

定量分析：以标准曲线CT值为基准，计算样品拷贝数。

定性判定：CT值≤35且扩增曲线呈S型为阳性。

注意事项

操作分区进行，避免气溶胶污染。

阳性对照需单独区域稀释，使用带滤芯枪头。

若用于绝对定量，建议每个浓度设3复孔。

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