嗜水气单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 嗜水气单胞菌染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Aeromonas hydrophila Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4242 |
检验原理
本试剂盒采用SYBR Green染料法荧光定量PCR技术，通过特异性引物扩增嗜水气单胞菌的保守基因序列。染料与双链DNA结合后释放荧光信号，通过实时监测荧光强度实现定量分析。灵敏度可达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级，适用于定性和定量检测。
试剂组成
2×SYBR qPCR MasterMix：含DNA聚合酶、dNTPs及优化缓冲体系（0.5 mL/管）。
荧光PCR专用模板稀释液：用于标准曲线制备或样品稀释（1 mL/管）。
阳性对照：嗜水气单胞菌标准品（浓度标注），用于排除假阴性。
阴性对照：无核酸酶水，确保无污染。
性能特点
高特异性：引物针对嗜水气单胞菌独特序列设计，避免交叉反应。
即开即用：预混MasterMix减少操作步骤，提升重复性。
快速扩增：配合快速PCR仪可在1小时内完成检测。
操作步骤
样本处理：提取待测样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。
反应体系：按20 μL体系配制（模板DNA 2 μL + MasterMix 10 μL + 引物混合液 2 μL + 稀释液补足）。
PCR程序：
预变性：95℃ 3分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 60℃ 30秒（采集荧光）
熔解曲线分析：60℃~95℃，每0.5℃升温5秒。
结果判读
定量分析：通过标准曲线计算拷贝数。
熔解曲线：单一峰表明扩增特异性，杂峰提示污染或非特异性扩增。
注意事项
避免反复冻融试剂，使用前需充分混匀。
实验环境需严格分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区）以防止污染。
若Ct值＞35，建议重复检测或重新采样。
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