血吸虫通用染料法荧光定量PCR试剂盒 新品

预期用途

本试剂盒基于 SYBR Green I 荧光染料法，通过对血吸虫属（Schistosoma spp.）保守基因片段（如ITS1/ITS2、18S rRNA等）的特异性扩增，实现对人畜共患血吸虫病原体（包括日本血吸虫、曼氏血吸虫、埃及血吸虫等）的定性及定量检测。适用于：

临床样本（血清、粪便、尿液）中血吸虫DNA的快速筛查

疫区环境水体/中间宿主钉螺的病原监测

抗血吸虫病药物疗效评估

检测原理

DNA提取：样本中提取基因组DNA。

qPCR扩增：

使用血吸虫属通用引物扩增靶标序列。

SYBR Green I 染料嵌入双链DNA，释放荧光信号。

实时荧光监测扩增曲线，通过Ct值判定结果。

试剂盒组成

| 组分 | 48T规格 | 储存条件 |

| 2× SYBR Green qPCR Master Mix | 1.2 mL | -20℃避光 |

| 血吸虫通用引物混合液（干粉/预混） | 2管 | -20℃ |

| ddH₂O（无核酸酶水） | 1.5 mL | 室温 |

| 阳性对照（血吸虫DNA）| 50 μL | -20℃ |

| 阴性对照（无核酸水） | 50 μL | -20℃ |

自备材料

DNA提取试剂盒（推荐柱提法）

实时荧光定量PCR仪

无菌PCR管/96孔板

离心机、涡旋振荡器、移液器及无菌吸头

操作步骤

1. DNA提取

按DNA提取试剂盒说明操作，最终用50 μL ddH₂O洗脱DNA。

2. qPCR反应体系配制（20 μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| 2× SYBR Green Master Mix | 10 |

| 通用引物混合液 | 2 |

| 模板DNA | 2 |

| ddH₂O | 6 |

注：每批反应需设 阳性对照（2 μL 阳性DNA）、阴性对照（2 μL ddH₂O）。

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | - |

| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | - |

| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | 40 | YES |

| 熔解曲线 | 65℃→95℃ | 0.5℃/step | 1 | YES |

结果判读

阳性判定：

Ct值 ≤ 35 且熔解曲线为单一峰值（Tm值：85±1℃）。

阴性判定：

Ct值 = Undetermined 或 >35，且熔解曲线无特异峰。

无效实验：

阳性对照Ct值异常或无扩增 → 重新检测。

阴性对照出现扩增曲线 → 排查污染。

性能参数

| 指标 | 参数 |

| 检测限（LoD） | 5拷贝/μL（质粒DNA） |

| 特异性 | 不与肝片吸虫、华支睾吸虫等交叉反应 |

| 重复性 | CV < 5%（Ct值） |

| 线性范围 | 10²~10⁸ 拷贝/μL（R²>0.99） |

注意事项

实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免气溶胶污染。

熔解曲线分析是区分非特异扩增的关键步骤。

若检测环境样本（如水样），需先进行富集浓缩处理。

试剂解冻后需涡旋混匀，短暂离心后使用。

储存与运输

储存：-20℃避光保存（避免反复冻融），有效期12个月。

运输：干冰或冰袋冷链运输。

公司正在出售的产品