短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 短古柏线虫染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Cooperia curticei Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4250 |
技术原理
基于染料法荧光定量PCR（SYBR Green I技术），通过特异性引物扩增短古柏线虫保守基因序列（如ITS或COI基因）。染料与双链DNA结合后发射荧光信号，实时监测扩增曲线，通过Ct值实现定性与定量分析。
核心特点
高特异性：引物针对短古柏线虫专属序列设计，避免与其他线虫（如蛔虫、钩虫）交叉反应。
高灵敏度：检测限低至100拷贝/反应，部分版本可达10²拷贝/毫升。
操作便捷：预混反应液（含DNA聚合酶、dNTPs等），即开即用。
防污染设计：一管式闭管操作，减少气溶胶污染风险。
试剂组成（以50次反应为例）
| 成分 | 规格 | 功能说明 |
| 2×qPCR MagicMix | 500μL（棕色管）| 含预混酶、缓冲液及dNTPs |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL（黄盖） | 样本稀释及阴性对照 |
| 短古柏线虫qPCR引物混合液 | 100μL（白盖） | 特异性扩增目标基因 |
| SYBR Green I染料 | 50μL（避光管）| 荧光信号标记双链DNA |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL（红盖） | 定量标准品 |
操作流程
样本制备
样本类型：粪便、肠内容物、组织（如肠道、淋巴结）。
DNA提取：推荐配套柱式提取试剂盒，确保纯度（A260/A280≈1.8-2.0）。
反应体系配制（冰上操作）
典型体系（20μL）：
2×qPCR MagicMix：10μL
引物混合液：2μL
SYBR Green I染料：1μL
模板DNA：2μL
超纯水补至20μL
PCR扩增程序
仪器兼容：ABI 7500、LightCycler等。
程序设置：
95℃预变性5分钟 → 40循环（95℃ 15秒 → 60℃ 45秒，采集荧光信号）。
结果分析
定量检测：以阳性对照log值为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线，计算样本浓度。
定性判定：
阴性：Ct≥40；阳性：Ct≤35；可疑（35<Ct<40）需复测。
注意事项
储存与运输：-20℃避光保存，避免反复冻融。
污染控制：分区操作（样本处理区、PCR扩增区），使用带滤芯枪头。
自备试剂：DNA模板、10×ROX校正染料（依机型需求）。
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