牛腺病毒3型 染料法荧光定量PCR 试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛腺病毒3型 染料法荧光定量PCR 试剂盒 | 英文名称 | Bovine Adenovirus Type 3 Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4279 |
预期用途
本试剂盒基于SYBR Green I染料法实时荧光定量PCR技术，用于定性检测牛腺病毒3型核酸，适用于临床样本、环境样本及疫苗质量控制中的病原学检测。
检验原理
试剂盒针对牛腺病毒3型基因组保守区域设计特异性引物，通过PCR扩增目标序列，SYBR Green I染料与双链DNA结合后释放荧光信号。荧光定量PCR仪实时监测扩增曲线，通过Ct值判定样本中病毒核酸的存在及相对含量。
试剂组成
TB Green Premix Ex Taq II（含DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液等）
牛腺病毒3型特异性引物（上下游各1管，序列见附录）
阴性对照（无核酸酶水）
阳性对照（含牛腺病毒3型靶序列的重组质粒）
储存条件及有效期
-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次），有效期12个月。
适用仪器
兼容ABI 7500、Bio-Rad CFX96、LightCycler 480等主流荧光定量PCR仪。
检测流程
样本处理
采用磁珠法或离心柱法提取样本RNA/DNA，建议使用配套核酸提取试剂。
反应体系配制（20μL/反应）
TB Green Premix Ex Taq II：10μL
上下游引物（10μM）：各1μL
模板DNA/RNA：1.5μL
无核酸酶水：补至20μL
PCR扩增程序
预变性：95℃ 1分钟
循环阶段（40次）：95℃ 15秒 → 51℃ 30秒（荧光采集）
熔解曲线分析：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒
结果判定
阳性：Ct值≤35，且熔解曲线出现单一峰值。
可疑：35<Ct值≤40，建议重复检测。
阴性：无Ct值或熔解曲线异常。
注意事项
实验分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区），避免污染。
阴阳性对照需同步检测，结果有效需满足：阳性对照Ct值≤30，阴性对照无扩增。
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