溃蚀齿密螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 溃蚀齿密螺旋体染料法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Treponema denticola Dye-based qPCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4314 |
检测原理
采用 SYBR Green I 荧光染料法：
特异性引物扩增靶标基因（如 tlyA 或 nox 基因）
SYBR Green 嵌入双链DNA，释放荧光信号
实时监测扩增曲线，实现靶标核酸定量检测
应用范围
猪痢疾（Swine Dysentery）的病原体检测
粪便、肠道内容物、组织样本中的T. hyodysenteriae核酸
适用于兽医诊断、养殖场疫病监控、科研
试剂盒组分
| 组分 | 体积/数量 |
| qPCR 预混酶（含SYBR Green） | 1.0 mL × 1 管 |
| 溃蚀齿密螺旋体引物混合液 | 100 μL × 1 管 |
| DNA 提取阳性对照 | 50 μL × 1 管 |
| 无核酸酶水 | 1 mL × 1 管 |
| RNase-Free DNase/RNase 管 | 48/96 个 |
操作流程
1. 样本处理
取粪便/组织样本，按DNA提取试剂盒（需自备）提取总DNA
2. PCR反应体系配制（20 μL）
| 组分 | 体积 |
| qPCR 预混酶 | 10 μL |
| 引物混合液 | 2 μL |
| 模板DNA | 2 μL |
| 无核酸酶水 | 补足至 20 μL |
3. 扩增程序（推荐）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 |
| 变性 | 95℃ | 10 sec | 40 |
| 退火/延伸 | 60℃ | 30 sec | |
| 熔解曲线分析 | 65℃→95℃ | 每0.5℃升 | 1 |
结果判读
阳性：扩增曲线呈“S”型，Ct值 ≤ 35.0
阴性：无扩增曲线（或 Ct值 > 38.0）
熔解曲线：单一峰（Tm值 ≈ 83±1℃）验证特异性
性能参数
灵敏度：≥ 10 copies/μL
特异性：不与猪密螺旋体（T. suis）、大肠杆菌等交叉反应
重复性：CV值 ≤ 5%
注意事项
实验室分区操作（样本处理区/PCR区）
使用无菌RNase-free耗材
阳性对照与样本分时操作，避免气溶胶污染
熔解曲线必做，排除非特异性扩增
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