牛免疫缺损病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 牛免疫缺损病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Bovine Immunodeficiency Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4333 |
预期用途
本试剂盒基于实时荧光PCR技术，通过特异性引物和荧光染料（如TB Green）对牛免疫缺损病毒RNA进行定量检测，适用于临床样本、动物组织或培养物中BVDV的病原学诊断及流行病学监测。
检验原理
核酸提取：样本中提取的RNA经逆转录合成cDNA。
荧光定量PCR：采用针对BVDV保守基因设计的引物（如BVDV1-R: 5'-GCAGCACCCTATCAGGCTGT-3'）及染料法（如TB Green）进行扩增，通过监测荧光信号实时判定病毒载量。
试剂组成
反应液：含PCR缓冲液、dNTPs、荧光染料等（如TB Green Premix Ex Taq II）。
酶混合液：逆转录酶与Taq DNA聚合酶。
阳性质控品：含BVDV特异性靶序列。
阴性质控品：无核酸酶水。
说明书：操作流程及结果判定标准。
储存条件及有效期
储存：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。
有效期：12个月。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪（如ABI 7500、Bio-Rad CFX96、LightCycler等）。
操作步骤
样本处理
使用核酸提取试剂盒（磁珠法/离心柱法）提取RNA，逆转录为cDNA。
反应体系配制（20μL/反应）
反应液10μL、上下游引物各1.0μL、cDNA模板1.5μL，DEPC水补至20μL。
PCR扩增程序
预变性：95℃ 1分钟；
循环扩增（40 cycles）：95℃ 15秒 → 51℃ 30秒（荧光采集）；
熔解曲线分析：95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟 → 95℃ 15秒。
结果判定
阈值设定：以阴性对照扩增曲线最高点为基准调整阈值线。
阳性判定：Ct值≤35且扩增曲线呈S型；Ct值>35或无扩增曲线判为阴性。
注意事项
分装试剂避免反复冻融，操作需在无核酸污染环境下进行。
阴阳性质控品需与样本同步检测，确保实验有效性。
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