伊蒙微小菌染料法荧光定量PCR试剂盒

伊蒙微小菌染料法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术（qPCR），采用特异性引物及TaqMan探针，专用于检测伊蒙微小菌（Emmonsia parva）的DNA。适用于环境样本（如土壤、空气）、临床样本（如痰液、支气管肺泡灌洗液）或真菌培养物的定性及定量分析，仅限科研用途，不可用于临床诊断。

核心原理

探针设计：

探针标记荧光报告基团（如FAM）和淬灭基团，特异性结合靶基因保守区域（如ITS或18S rRNA）。

PCR扩增时，Taq酶切割探针释放荧光信号，通过实时监测信号强度实现定量分析。

定量范围：

线性范围覆盖5个数量级，最低检测限为100拷贝/反应。

试剂盒组成

| 成分 | 规格/包装 | 功能说明 |

| 2×Probe qPCR MasterMix | 500μL | 含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺及热启动Taq酶 |

| 荧光PCR模板稀释液 | 1mL | 用于模板或对照稀释 |

| 伊蒙微小菌引物-探针干粉 | 50次反应用量 | 预混优化引物及探针 |

| 阳性质控品（人工DNA） | 50μL（1×10⁷拷贝/μL） | 用于标准曲线绘制及质控 |

| 阴性质控品（超纯水） | 50μL | 监测污染及假阳性 |

注：不同批号成分不可混用，阳性质控品需单独存放。

性能特点

高灵敏度：可检测低至100拷贝/反应的DNA。

高特异性：引物针对伊蒙微小菌保守序列设计，与常见真菌（如曲霉、念珠菌）无交叉反应。

即开即用：用户仅需提供DNA模板，20μL体系反应，50次检测/盒。

抗干扰性：优化缓冲体系适用于复杂样本（如含抑制物的痰液）。

操作流程

样本处理：

使用核酸纯化试剂盒提取样本DNA，建议浓度≥10 ng/μL。

反应体系配制：

按20μL体系混合MasterMix、引物-探针、模板及对照。

qPCR程序：

预变性：95℃ 2分钟 → 循环阶段（95℃ 15秒 → 60℃ 1分钟，40循环）。

数据分析：

通过标准曲线计算样本DNA拷贝数，阈值循环数（Ct值）≤35判为阳性。

注意事项

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（有效期12个月）。

运输：干冰或冰袋低温运输。

污染控制：建议在洁净PCR操作台分装试剂，使用无核酸酶耗材。

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