施马伦贝格病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒（SN/T 4661-2016）

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量RT-PCR技术，专用于检测施马伦贝格病毒（Schmallenberg Virus, SBV）。该病毒为RNA病毒，主要感染牛、羊等反刍动物，导致发热、产奶量下降及幼畜先天畸形。本产品适用于科研领域，具备高灵敏度和特异性，符合SN/T 4661-2016标准。

产品特点

即开即用：用户仅需提供RNA模板。

高灵敏度：优化引物及探针，检测限低至10²拷贝/μL。

内控设计：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），避免假阴性。

特异性强：靶向SBV保守序列，无交叉反应。

双重用途：支持定性与绝对定量分析，线性范围达5个数量级（10²~10⁷拷贝/μL）。

规格：50次/盒（20μL体系）。

组分清单

| 成分 | 规格/包装 | 保存条件 |

| qRT-PCR缓冲液（蓝盖） | 500 μL | -20℃避光 |

| qRT-PCR酶混合液（红盖） | 100 μL | -20℃避光 |

| 荧光模板稀释液（黄盖） | 1 mL | -20℃ |

| SBV引物混合液（白盖） | 100 μL | -20℃ |

| SBV探针（棕色管） | 50 μL | -20℃避光 |

| 阳性对照（黄盖） | 50 μL（10⁸拷贝/μL） | 单独存放，-20℃ |

| 使用手册 | 1份 | - |

操作流程

1. 标准曲线制备（样本制备区）

用阳性对照进行10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每步更换枪头，冰上操作。

2. RNA提取

自备RNA提取试剂，推荐柱式法（如柱式病毒RNAout）。

3. 反应体系配制（试剂准备区）

按以下比例混合（单次反应）：

缓冲液：10 μL

酶混合液：2 μL

探针：1 μL

引物混合液：2 μL

模板RNA：5 μL（样品）或标准品稀释液5 μL（标准曲线管）。

4. qRT-PCR程序

逆转录：50℃ 30 min

预变性：94℃ 10 min

扩增（40循环）：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM通道信号）。

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈S型；

阴性：Ct≥40或无Ct值；

可疑（35<Ct<40）：需复测。

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需独立区域，避免污染。

试剂使用前离心混匀，避光保存。

阳性对照单独存放，防止污染其他组分。

实验后消毒台面（10%次氯酸或75%乙醇）。

运输与保存

低温运输（-20℃），保存期12个月。

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