施马伦贝格病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 施马伦贝格病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Schmallenberg Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR3265 |
产品概述
本试剂盒专用于施马伦贝格病毒（Schmallenberg Virus, SBV）的染料法荧光定量RT-PCR检测，具有高特异性和灵敏度。试剂盒包含预混反应体系、阳性对照及专用稀释液，适用于50次20μL体系的检测，操作便捷，即开即用。
主要组分
荧光定量PCR预混液：含Taq DNA聚合酶、dNTPs、缓冲液及荧光染料。
阳性对照：10^8拷贝/μL的DNA片段（非活体样本，避免生物污染风险）。
模板稀释液：用于阳性对照的梯度稀释。
操作步骤
阳性对照稀释（以10^2–10^7拷贝/μL梯度为例）
分区操作：在独立洁净区域进行，避免交叉污染。
标记离心管：编号为2–7号，分别加入45 μL模板稀释液。
梯度稀释：
7号管：加入5 μL 10^8拷贝/μL阳性对照，震荡混匀，得到10^7拷贝/μL标准品。
依次稀释至2号管（10^2拷贝/μL），每次更换枪头。
保存：稀释后的标准品置于冰上备用。
PCR反应体系配制
反应体系：20 μL/反应，包括预混液、引物探针混合物及待测模板（或稀释后的标准品）。
程序设置：
逆转录：50°C 15分钟（若含RNA模板）。
预变性：95°C 3分钟。
扩增循环：95°C 15秒 → 60°C 30秒（40个循环），荧光信号采集于退火阶段。
数据分析
使用荧光定量PCR仪分析扩增曲线和Ct值。
通过标准曲线计算样品中SBV的拷贝数。
注意事项
避免污染：操作时需分区（试剂准备区、样本处理区、扩增区），使用带滤芯枪头。
质量控制：每批次实验需包含阴性对照（无模板对照）和阳性对照。
保存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
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