非洲马瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 非洲马瘟病毒染料法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | African Horse Sickness Virus Dye-based qRT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4616 |
产品用途
科研用途,用于非洲马瘟病毒(AHSV)的快速、灵敏定量检测。
产品特点
即开即用:预混优化引物、探针及反应体系,用户仅需提供RNA模板。
高灵敏度:检测限可达1-10病毒颗粒/反应,引物针对VP7等保守基因设计(如正向5'-ATGTCACATCCGAGGTCG-3',反向5'-TCAACGTCTACGACGGT-3')。
高特异性:与其他马属动物病毒(如马流感病毒)无交叉反应。
内控设计:含阳性对照,可区分假阴性结果。
标准化流程:适配主流实时荧光PCR仪,全程耗时约4-6小时。
检测原理
基于实时荧光定量RT-PCR技术:
逆转录(RT):42℃条件下将病毒RNA逆转录为cDNA。
PCR扩增:
初始变性:95℃ 10分钟;
40个循环:95℃ 15秒(变性),60℃ 1分钟(退火/延伸),实时采集FAM荧光信号。
结果判读:
阳性:Ct值<35;
可疑:Ct值35-40,需复测;
阴性:Ct值>40或无扩增曲线。
操作步骤
RNA提取:建议使用商业试剂盒(如Qiagen RNeasy)提取样本RNA,冰上操作以防降解。
反应体系配制:按说明书比例加入RNA模板、预混液及对照。
上机检测:设置PCR程序并运行,软件自动生成扩增曲线及Ct值。
数据分析:根据阈值循环数(Ct)判定病毒载量。
注意事项
样本处理:避免反复冻融RNA,提取后尽快检测。
污染控制:分区操作(试剂配制区、样本处理区、扩增区),使用无RNase耗材。
局限性:仅限科研使用,临床诊断需进一步验证。
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