猴泡沫病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒

产品用途

本试剂盒基于TaqMan探针法实时荧光定量RT-PCR技术，专用于检测猴泡沫病毒（SFV）的核酸，适用于科研领域的定性及定量分析，不可用于临床诊断。

产品特点

即开即用：用户仅需提供RNA模板，试剂盒包含预混优化组分。

高灵敏度与特异性：引物及探针针对SFV高度保守区设计，避免与其他病毒RNA交叉反应。

双重检测功能：支持定性（阳性/阴性判断）和定量分析（线性范围≥5个数量级）。

内控设计：提供阳性质控品（无传染性DNA片段）和阴性质控品，便于结果验证。

兼容性：适配主流荧光定量PCR仪（如ABI、Bio-Rad、LightCycler等）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 备注 |

| SFV扩增液 | 50μL×1管 | 含引物、探针及缓冲体系 |

| SFV反应液 | 950μL×1管 | 酶混合液（逆转录酶、Taq酶等）|

| 阳性质控品 | 50μL×1管 | 1×10^8拷贝/μL（非活体DNA） |

| 阴性质控品 | 50μL×1管 | DEPC-H2O |

| 说明书 | 1份 | |

自备材料

无核酸酶离心管、滤芯吸头、RNA提取试剂盒、荧光定量PCR仪。

操作步骤

1. RNA提取

使用商品化病毒RNA提取试剂盒（推荐柱式法），提取样本RNA（如组织、血液）。

若需保存，RNA应置于-70℃（长期）或-20℃（短期）。

2.标准曲线制备（定量分析需进行）

标记6管，依次加入45μL稀释液，梯度稀释阳性质控品（10^8拷贝/μL起始），获得10^7至10^2拷贝/μL的系列浓度标准品。

每步稀释需更换枪头，避免交叉污染。

3. PCR反应体系配制（20μL/反应）

| 组分 | 体积（μL） |

| SFV反应液 | 19 |

| SFV扩增液 | 1 |

| RNA模板/标准品/对照 | 5 |

4.扩增程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 荧光采集（FAM通道） |

| 逆转录 | 50℃ | 15-30 min | 否 |

| 预变性 | 95℃ | 3-10 min | 否 |

| 扩增（40循环） | 95℃ 15 sec → 55-60℃ 30-60 sec | 是（每循环） |

结果判读

定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。

定性分析：

阳性：Ct≤35，扩增曲线呈指数增长。

可疑：35<Ct≤40，需复测确认。

阴性：无Ct值或Ct>40。

注意事项

分区操作：样本制备、试剂配制、扩增需在独立区域进行，避免污染。

储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融（≤5次）。有效期12个月。

质量控制：每次实验需包含阴/阳性对照，确保结果可靠性。

声明：本产品仅限科研使用，严禁用于临床诊断或其他非科研用途。

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