检测原理
基于TaqMan探针技术，通过Taq酶的5'→3'核酸外切酶活性切割探针，释放荧光报告基团（FAM通道），实现实时定量。探针5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物累积量成正比，通过标准曲线计算模板起始浓度。
产品名称 | 米曲霉通用型探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Universal Aspergillus oryzae Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4869 |
产品特点
高灵敏性：检测限低至100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^1~10^6拷贝/μL）。
高特异性：针对米曲霉保守序列设计引物及探针，无交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶混合液及优化引物探针，仅需提供样品RNA/DNA模板。
质控完善：含阳性对照（1×10^8拷贝/μL）及阴性对照，确保结果可靠性。
适用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| 探针法qPCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 米曲霉引物混合液 | 100μL |
| 米曲霉探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
用阳性对照按10倍梯度稀释（10^7~10^2拷贝/μL），每个梯度单独使用带芯枪头操作，避免污染。
2. 样品制备
提取样品RNA/DNA，建议设置N+2个样本（含阴/阳性对照）。
阴性对照：超纯水；阳性对照：试剂盒提供模板。
3. PCR反应体系（20μL）
| 成分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| 模板 | 5μL |
4. 反应程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增（40循环） | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号） |
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样品浓度。
定性分析：阴性对照Ct≥40，阳性对照Ct≤35为有效。
注意事项
操作分区进行（试剂准备区、样品处理区、扩增区），避免气溶胶污染。
标准品稀释需独立操作，防止交叉污染。
反复冻融不超过3次，建议分装保存。
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