黑曲霉探针法荧光定量PCR试剂盒 新品

检测原理

基于TaqMan探针法荧光定量PCR技术，针对黑曲霉高度保守基因区域设计特异性引物及探针。通过实时监测扩增过程中的荧光信号（FAM通道），实现核酸的定性与定量检测，灵敏度高（可检测低至10^1拷贝/μL），线性范围达5个数量级。

试剂盒组成

qPCR缓冲液（500μL）

酶混合液（50μL）

荧光PCR模板稀释液（1mL）

引物-探针干粉（50T）

阳性对照（10^7拷贝/μL，50μL）

阴性对照（无核酸酶水，50μL）

操作步骤

标准曲线制备

标记6管，分别加入45μL稀释液。

梯度稀释阳性对照（10^7拷贝/μL起始），依次得到10^6~10^1拷贝/μL的标准品，冰上暂存。

样本DNA提取

使用兼容的核酸提取试剂盒，建议设置N+2管（含阳性/阴性对照）。

qPCR反应设置

体系：20μL/反应（含19μL预混液+1μL模板）。

程序：

50℃ 10min（逆转录，若需）；

95℃ 10min（预变性）；

95℃ 15sec → 60℃ 60sec（40循环，FAM通道采集信号）。

数据分析

定量：以标准曲线log值为横轴，Ct值为纵轴计算样本浓度。

定性：

阳性：Ct≤35且呈指数曲线；

可疑：35<Ct≤38，需复测；

阴性：Ct≥40或无扩增。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在不同区域进行，避免污染。

质量控制：每批次实验需包含阴/阳性对照。

样本要求：

短期保存于-20℃，长期需-70℃（避免反复冻融）；

运输使用2~8℃冰袋。

局限性：

基因突变可能导致假阴性；

交叉污染或操作失误可能导致假阳性。

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