检测原理
基于探针法荧光定量PCR技术，通过Taq酶的5'→3'外切酶活性水解探针，释放报告基团（如FAM）荧光信号。探针5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物累积量成正比，实现靶标RNA/DNA的定量分析。
产品名称 | 甲基营养型芽孢杆菌探针法qPCR试剂盒 | 英文名称 | Bacillus methylotrophicus Probe-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4882 |
产品特点
高灵敏性：引物与探针针对Bacillus methylotrophicus保守序列优化，检测限低至10²拷贝/μL。
高特异性：不与相近菌种或病毒RNA发生交叉反应。
即开即用：预混缓冲液、酶、引物及探针，用户仅需提供RNA模板。
内控对照：含阳性对照（1×10⁸拷贝/μL），可区分假阴性结果。
应用范围：科研用途（不可用于临床诊断）。
试剂盒组成
| 成分 | 规格 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 100μL |
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 引物混合液 | 100μL |
| 探针 | 50μL |
| 阳性对照（1×10⁸拷贝/μL） | 50μL |
| 说明书 | 1份 |
操作步骤
标准曲线制备：
用阳性对照按10倍梯度稀释（10²~10⁷拷贝/μL），分装至标记离心管（7~2号）。
每管加入45μL稀释液及5μL上一步稀释液，涡旋混匀。
样本RNA提取：
使用兼容的RNA提取试剂盒，建议设置阴性（水）和阳性对照（稀释阳性模板）。
qPCR反应体系（20μL）：
| 成分 | 体积 |
| qPCR缓冲液 | 10μL |
| 酶混合液 | 2μL |
| 探针 | 1μL |
| 引物混合液 | 2μL |
| RNA模板 | 5μL |
扩增程序：
逆转录：50℃ 30 min
预变性：94℃ 10 min
40循环：94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集FAM信号）
数据分析
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性分析：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30；样本Ct≤35判为阳性。
注意事项
分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。
使用带滤芯枪头，反应液避光保存。
实验后清洁台面（次氯酸或75%乙醇）。
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关键字： 甲基营养型芽孢杆菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;