检测原理
基于实时荧光定量PCR技术（探针法），通过Taq酶的5'→3'外切酶活性切割探针，释放荧光报告基团（如FAM），实现靶序列的定量检测。探针5'端标记荧光基团，3'端标记淬灭基团，扩增过程中荧光信号与产物积累呈正比，通过标准曲线计算模板浓度。
产品名称 | 侧孢短芽孢杆菌探针法qPCR试剂盒 | 英文名称 | Brevibacillus laterosporus Probe-based qPCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4883 |
试剂盒组成
| 成分 | 规格 | 功能 |
| qPCR缓冲液 | 500μL | 提供反应体系基础环境 |
| qPCR酶混合液 | 100μL | 含逆转录酶、Taq酶等 |
| 探针及引物混合液 | 各50-100μL | 特异性识别靶序列 |
| 阳性对照（无传染性DNA片段） | 50μL（1×10⁸拷贝/μL） | 标准曲线制备 |
| 模板稀释液 | 1mL | 标准品梯度稀释 |
| 说明书 | 1份 | 操作指南 |
操作步骤
1. 标准曲线制备
将阳性对照按10倍梯度稀释（10⁷~10²拷贝/μL），每个梯度独立操作以避免污染。
2. 样本处理
RNA提取：推荐使用柱式提取法，避免抑制剂残留。
阴性/阳性对照设置：每批次检测需包含无模板对照（NTC）及阳性对照。
3. qPCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 缓冲液 | 10 |
| 酶混合液 | 2 |
| 探针 | 1 |
| 引物混合液 | 2 |
| 模板 | 5 |
4. 扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |
| 逆转录 | 50℃ | 30 min | 1 |
| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |
| 扩增 | 94℃ 15 sec → 60℃ 1 min（采集荧光） | 40 |
结果分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴，计算样本浓度。
定性检测：
阳性：Ct≤36，典型扩增曲线；
阴性：Ct≥40；
可疑值（36<Ct<40）：需复测确认。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需在独立区域进行，防止交叉污染。
质量控制：每批检测需包含阴/阳性对照，异常结果需复核。
保存与运输：-20℃避光保存，低温运输，避免反复冻融（≤7次）。
适用范围：仅限科研使用，不可用于临床诊断。
局限性
检测结果受样本质量、提取效率及操作规范影响。
高浓度模板可能抑制反应，建议稀释后复测。
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关键字： 侧孢短芽孢杆菌;染料法荧光定量;PCR试剂盒;
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