产品概述
本试剂盒采用SYBR Green I荧光染料法，针对侧孢短芽孢杆菌的特异性基因序列（如bls基因或16S rRNA保守区）设计引物，实现对样品中侧孢短芽孢杆菌DNA的高灵敏度、高特异性定量检测。适用于环境样本、农产品、微生物制剂等的快速检测。
产品名称 | 侧孢短芽孢杆菌染料法qPCR试剂盒 | 英文名称 | Brevibacillus laterosporus Dye-based Quantitative Real-time PCR Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR2731 |
检测原理
DNA提取：样本中提取微生物DNA
qPCR扩增：
特异性引物扩增靶基因
SYBR Green I嵌入双链DNA，释放荧光信号
实时监测荧光强度，生成扩增曲线
结果分析：通过Ct值（阈值循环数）定量目标菌浓度
试剂盒组分（48 tests）
| 组分 | 体积 | 储存条件 |
| qPCR Master Mix (2×) | 1.25 mL | -20℃避光 |
| B. laterosporus 引物混合液（10 μM） | 100 μL | -20℃ |
| DNA模板阳性对照 | 50 μL | -20℃ |
| Nuclease-Free Water | 1 mL | 室温 |
| RNase/DNase-Free离心管 | 48个 | 室温 |
检测性能
灵敏度：最低检出限 ≤ 10 copies/μL DNA
特异性：
阳性：侧孢短芽孢杆菌（ATCC 64）
阴性对照：短芽孢杆菌属其他种（如B. brevis）、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌等
扩增效率：90–110%
线性范围：10² ~ 10⁸ copies/μL
操作步骤
1. DNA模板制备
按标准方法提取样本DNA（推荐使用细菌基因组DNA提取试剂盒）。
2. qPCR反应体系配制（20 μL/反应）
| 组分 | 体积 |
| 2× SYBR Green Master Mix | 10 μL |
| 引物混合液 | 0.8 μL |
| DNA模板 | 2 μL |
| Nuclease-Free Water | 7.2 μL |
3. qPCR程序设置（以ABI 7500为例）
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | - |
| 变性 | 95℃ | 15 sec | 40 | - |
| 退火/延伸 | 60℃ | 45 sec | 40 | YES |
| 熔解曲线分析 | 65℃ → 95℃ | 每0.5℃升5 sec | 1 | YES |
结果判读标准
阳性：Ct值 ≤ 35，且熔解曲线峰值Tm值符合预期（示例：Tm = 86±1℃）。
可疑：Ct值 35–38，建议重复检测。
阴性：无Ct值或Ct值 ≥ 38，熔解曲线无特异峰。
注：熔解曲线单一峰确保扩增特异性，排除引物二聚体干扰。
注意事项
试剂开封后需分装保存，避免反复冻融（≥3次）。
实验环境严格分区（样本处理区、PCR配制区、扩增区）。
阴性对照（无模板水）与阳性对照需同步运行。
储存与运输
储存：-20℃避光保存（有效期12个月）
运输：低温冰袋（-4~25℃）
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