猪蓝耳病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪蓝耳病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus (PRRSV) Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4647 |
预期用途
本试剂盒基于实时荧光定量PCR技术，定性检测猪蓝耳病毒（PRRSV）核酸，适用于血液、血清、肺脏、淋巴结及脾脏等样本的检测，为临床诊断和疗效评估提供辅助依据。
检验原理
通过设计特异性引物和探针，靶向PRRSV基因组保守区域。在PCR扩增过程中，探针与目标序列结合释放荧光信号，经荧光定量PCR仪实时监测，实现病毒核酸的定性分析。
主要组成成分
| 组分 | 规格（50 T/盒） |
| PCR反应液 | 1000 μL ×1管 |
| 阳性对照 | 40 μL ×1管（灭活PRRSV） |
| 阴性对照 | 40 μL ×1管（牛基因组DNA）|
| 说明书 | 1份 |
储存条件及有效期
储存条件：-20℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：12个月。
适用仪器
支持ABI系列、Bio-Rad系列、Roche LightCycler 480、杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪（FAM通道检测）。
样本要求
血液/血清：无菌采集后离心取上清。
组织样本：取2-3克研磨匀浆，3000 rpm离心10分钟取上清。
保存要求：
立即检测或2-8℃冷藏保存≤24小时；
长期保存需-80℃冻存，避免反复冻融。
检验方法
1. 试剂准备
反应体系配制（每份）：
PCR反应液：20 μL
样本DNA/阳性/阴性对照：5 μL
总反应体积：25 μL/管。
2. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度/时间 | 循环数 |
| UNG处理 | 37℃ 2分钟 | 1 |
| 预变性 | 95℃ 5分钟 | 1 |
| 扩增 | 95℃ 5秒 → 55℃ 30秒 | 40 |
信号采集：55℃阶段结束时采集FAM通道荧光信号。
结果判读
阳性：Ct值≤35或出现S型扩增曲线。
可疑：Ct值35-38，需复测确认。
阴性：Ct值＞38或无扩增曲线。
注意事项
实验室规范：需符合基因扩增实验室管理要求，分区操作（试剂准备区、样本处理区、扩增区）。
防污染措施：
使用无核酶耗材；
实验后以10%次氯酸或75%酒精消毒工作台；
废弃反应管需灭菌处理。
操作要点：
避免气泡产生及反应管泄漏；
试剂使用前需充分混匀并瞬时离心；
不同批号试剂不可混用。
性能指标
最低检出限：10³ Copies/mL。
精密度：CV值≤3%。
局限性
低病毒载量样本（＜10³ Copies/mL）可能导致假阴性。
样本处理不当（如RNA降解或交叉污染）可能影响结果准确性。
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