鼠肺炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 鼠肺炎病毒探针法荧光定量RT-PCR试剂盒 | 英文名称 | Murine Pneumovirus Probe-based Fluorescent Quantitative RT-PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4678 |
产品简介
鼠肺炎病毒（PVM）属于副黏病毒科肺病毒属，可感染小鼠、大鼠等啮齿动物，引起呼吸道疾病。本试剂盒基于TaqMan探针法荧光定量RT-PCR技术，针对PVM高度保守区设计特异性引物及探针，适用于科研领域中对PVM核酸的定性或定量检测，具有高灵敏性、高特异性及宽线性范围（5个数量级）等特点。
检验原理
采用一步法荧光RT-PCR技术，通过逆转录合成cDNA后，利用探针法实时监测扩增过程，荧光信号强度与病毒RNA拷贝数呈正相关。
主要成分
| 成分 | 规格/含量 | 功能说明 |
| 扩增液 | 50μL×1管 | 含逆转录酶、PCR酶等 |
| 反应液 | 950μL×1管 | 含缓冲液、dNTPs等 |
| 阳性质控品 | 5.59×10⁴拷贝/μL×1管 | 用于标准曲线建立及质控 |
| 阴性质控品 | 50μL×1管 | 排除污染及假阳性 |
适用仪器
兼容ABI、Bio-Rad、LightCycler等主流荧光定量PCR仪（需配备FAM通道）。
样本要求
样本类型：组织（1g）、全血（血清）、病毒培养物等。
保存与运输：短期-20℃保存，长期-70℃（≤6个月）；运输需2~8℃冰袋。
操作步骤
样本处理
组织样本：匀浆后离心取上清；血清样本直接取100μL。
RNA提取：推荐使用商品化病毒RNA提取试剂盒。
试剂配制
按比例混合反应液（19μL）与扩增液（1μL），分装至PCR管。
加样
加入5μL模板RNA、阳性质控品或阴性质控品。
PCR扩增
程序设置：
逆转录：50℃ 30min
预变性：94℃ 10min
扩增（40循环）：94℃ 15s → 60℃ 1min（采集FAM信号）
数据分析
定量检测：以标准曲线（阳性质控品梯度稀释）计算样本拷贝数。
定性检测：
阳性：Ct≤36（需典型扩增曲线）；阴性：Ct≥40；
灰区（36<Ct<40）需复测。
注意事项
严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免交叉污染。
试剂避光保存，避免反复冻融（≤5次）。
实验废弃物需按生物安全规范处理。
储存条件及有效期
-20℃避光保存，有效期12个月。
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