猪流感病毒（H1型）探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 猪流感病毒（H1型）探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Swine Influenza Virus (H1) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4670 |
产品基本信息
规格：50次/盒（20μL反应体系）
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月；运输需低温。
适用样本：肺组织、气管分泌物、鼻拭子等临床样本中提取的RNA。
检验原理
基于探针法荧光定量PCR技术，针对猪流感病毒H1亚型高度保守基因区域设计特异性引物及探针，通过实时荧光信号检测靶标RNA。具备以下特性：
高灵敏度：最低检测限为100拷贝/反应。
高特异性：不与其它病原体核酸发生交叉反应。
双重功能：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级。
内控设计：提供无传染性的DNA阳性对照，避免假阴性。
适用仪器
兼容主流荧光定量PCR仪，包括：
ABI 7500/QuantStudio系列
安捷伦MX3000P/3005P
Roche LightCycler 480
Bio-Rad CFX系列
Eppendorf Mastercycler ep realplex
试剂盒组成
PCR反应液：含优化缓冲体系、dNTPs、Mg²⁺等。
酶混合液：热启动Taq酶、逆转录酶。
阳性对照：非传染性DNA片段（1×10⁷拷贝/μL）。
阴性对照：无RNA酶水。
荧光探针：FAM标记，淬灭基团为NFQ-MGB。
操作步骤
1. 试剂准备区
将试剂解冻后涡旋混匀，瞬时离心。
按反应数（样本数+阴阳性对照）配制主混合液（每反应：19μL反应液+1μL酶液），分装至PCR管。
2. 样本处理区
RNA提取：推荐使用磁珠法或离心柱法提取样本RNA（需自备提取试剂盒）。
加样：每管加入5μL RNA模板（样本/阴性对照/阳性对照），终体积25μL。
3. PCR扩增程序
| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |
| 逆转录 | 42℃ | 10 min | 1 | 否 |
| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |
| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是（55℃ 40 sec） |
4. 结果分析
阈值设定：Baseline起始3-15，终止5-20；Threshold需覆盖指数增长期。
判读标准：
阳性：Ct≤35，且有S型扩增曲线。
可疑：35<Ct≤38，需复测确认。
阴性：Ct>38或无扩增。
注意事项
分区操作：严格区分试剂准备区、样本处理区、扩增区，避免交叉污染。
防降解：样本处理需在冰上操作，提取后RNA尽快检测。
质控要求：每批次实验必须包含阴阳性对照。
仪器设置：ABI系列需关闭ROX校正，淬灭基团选择“None”。
局限性
低浓度样本（<100拷贝/反应）可能导致假阴性。
样本采集或保存不当（如反复冻融）可能影响结果准确性。
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