产品基本信息

规格:50次/盒(20μL反应体系)
保存条件:-20℃避光保存,避免反复冻融,有效期12个月。
运输条件:低温避光运输。
适用范围:科研用途(不可用于临床诊断)。
产品名称 | 竹茹探针法PCR鉴定试剂盒 | 英文名称 | Bambusa tuldoides Probe-based PCR Identification Kit |
产品规格 | 50T | 产品分类 | 荧光定量PCR |
检测类型 | PCR检测 | 产品货号 | PR4900 |

检测原理

基于探针法荧光定量PCR技术:
探针设计:5'端标记荧光报告基团(如FAM),3'端标记淬灭基团,探针结合靶序列后被Taq酶切割,释放荧光信号。
实时检测:通过监测PCR扩增过程中荧光强度的增长,实现对目标DNA/RNA的定量分析(Ct值)。
高特异性:引物及探针针对竹茹(Caulis bambusae in taenia)高度保守区域设计,避免交叉反应。
试剂盒组成

| 成分 | 规格/含量 |
| 探针法qPCR缓冲液 | 500μL |
| qPCR酶混合液 | 100μL(含逆转录酶)|
| 荧光PCR模板稀释液 | 1 mL |
| 竹茹特异性引物混合液| 100μL |
| 竹茹qPCR探针 | 50μL |
| 阳性对照(1×10⁸拷贝/μL)| 50μL |
| 说明书 | 1份 |
实验步骤

标准曲线制备(10²~10⁷拷贝/μL梯度稀释)
取6支离心管,编号2~7,每管加入45μL模板稀释液。
从阳性对照(10⁸拷贝/μL)开始,依次10倍稀释至10⁷~10²拷贝/μL,冰上保存。
样本DNA/RNA提取
推荐使用柱式提取法或兼容的RNA/DNA提取试剂盒。
设置阴性对照(NC,超纯水)和阳性对照(PC,稀释后的阳性标准品)。
qPCR反应体系(20μL)
| 成分 | 样品管(μL) | 阴性对照(μL) | 标准曲线管(μL) |
| qPCR缓冲液 | 10 | 10 | 10 |
| 酶混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 探针 | 1 | 1 | 1 |
| 引物混合液 | 2 | 2 | 2 |
| 样本模板 | 5 | - | - |
| 标准曲线稀释液 | - | - | 5(对应梯度) |
| 超纯水 | - | 5 | - |
PCR程序设置
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 逆转录(若需) | 50℃ | 30 min |
| 预变性 | 94℃ | 10 min |
| 扩增(40循环) | 94℃ | 15 sec |
| | 60℃ | 1 min(采集荧光) |
数据分析
定量分析:以标准品log拷贝数为横轴、Ct值为纵轴绘制标准曲线,计算样本浓度。
定性判定:阴性对照Ct≥40;阳性对照Ct≤30,样本Ct≤35判为阳性。
注意事项

操作分区进行,避免气溶胶污染。
探针避光保存,反复冻融≤3次。
实验废弃物需按生物安全规范处理。
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