鼠腺病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

鼠腺病毒探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

产品概述

本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于小鼠腺病毒（Murine Adenoviruses, MAdV）的定性及定量检测。适用于科研用途，可检测MAdV-1、MAdV-2和MAdV-3等亚型，灵敏度达100拷贝/反应，线性范围覆盖5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。

产品组成

| 成分 | 规格 | 包装形式 |

| 2×Probe qPCR MasterMix | 0.5 mL | 本色管 |

| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1 mL | 1.5 mL绿盖管 |

| 超纯水 | 1 mL | 1.5 mL蓝盖管 |

| qPCR引物-探针干粉 | 50次反应 | 0.5 mL棕色管 |

| 阳性对照（1×10^7拷贝/μL）| 50 μL | 0.5 mL黄盖管 |

| 使用手册 | 1份 | 纸质文档 |

注：引物-探针干粉需加入165 μL超纯水复溶后使用，未用完部分需-20℃保存。

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

标记6管（6–1号），每管加45 μL稀释液。

6号管加5 μL阳性对照（1×10^7拷贝/μL），震荡混匀得1×10^6拷贝/μL标准品，依次稀释至1号管（1×10^1拷贝/μL）。

2. 样本DNA提取

建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的DNA提取试剂盒纯化。

3. qPCR反应体系（20 μL/管）

| 成分 | 样本管（N+2） | 阴性对照 | 标准曲线管 |

| 2×Probe MasterMix | 10 μL | 10 μL | 10 μL |

| 引物-探针混合液 | 3 μL | 3 μL | 3 μL |

| 样本DNA/标准品/水 | 7 μL | 7 μL水 | 7 μL标准品 |

4. 反应程序

预变性：95℃ 10 min

45循环：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集FAM通道信号，淬灭基团TAMRA）

数据分析

定量检测：以标准品log拷贝数为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样本浓度。

定性检测：

阴性：Ct≥40或无信号；

阳性：Ct<40且扩增曲线典型；

灰区（36–40 Ct）：需重复检测。

注意事项

分区操作：样本处理、试剂配制、PCR扩增需在不同区域进行，避免交叉污染。

质量控制：若阳性对照无信号或阴性对照出现扩增，实验无效需重做。

保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。

安全规范：实验废弃物需按生物危害物处理，使用10%次氯酸或75%酒精消毒台面。

局限性

检测结果受样本质量、提取效率及操作规范影响。

病毒基因突变可能导致假阴性；污染风险可能导致假阳性。

本产品仅限科研使用，不适用于临床诊断。

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