检测原理
基于实时荧光定量PCR技术，通过特异性探针与靶DNA结合，在扩增过程中释放荧光信号，实现对月季花DNA的定性检测。引物及探针经生物信息学验证，确保100%种属特异性，灵敏度达10³ copies/μL。
产品名称
月季花探针法PCR鉴定试剂盒
英文名称
Flos Rosae Chinensis Probe-based PCR Identification Kit
产品规格
50T
产品分类
荧光定量PCR
检测类型
PCR检测
产品货号
PR4914
试剂盒组成
PCR反应液：含dNTPs、Mg²⁺、缓冲体系及热启动酶。
探针引物混合液：特异性引物对及荧光标记探针。
阳性对照：人工合成月季花靶基因片段（1×10⁸ copies/μL）。
阴性对照：无核酸酶水。
使用说明书（当前文件）。
操作步骤
1. 实验分区要求
试剂准备区：配制反应体系，需使用无核酶耗材。
样本处理区：在生物安全柜中提取DNA，操作温度0-4℃。
扩增区：独立仪器及耗材，避免交叉污染。
2. 样本处理
提取DNA后立即检测，或-80℃短期保存。
3. PCR体系配制（50μL体系）
| 组分 | 体积（μL） |
| PCR反应液 | 25 |
| 探针引物混合液 | 5 |
| 模板DNA | 5-10 |
| 无核酸酶水 | 补足至50 |
4. 扩增程序
预变性：95℃ 5 min
循环（40次）：95℃ 15 sec → 60℃ 30 sec（采集荧光）
5. 结果判读
阳性：Ct值≤35，且扩增曲线呈S型。
阴性：无扩增曲线或Ct值＞38。
注意事项
防污染措施：
使用带滤芯吸头，分区操作。
扩增后产物需无害化处理（如10%次氯酸浸泡）。
仪器设置：
ABI系列仪器需关闭ROX校正，淬灭基因选择“None”。
质控要求：
每批次实验需包含阴/阳性对照。
不同批号试剂禁止混用。
性能参数
特异性：经40种近缘种验证，无交叉反应。
灵敏度：最低检测限10³ copies/μL。
重现性：批内/批间变异系数＜5%。
局限性说明
样本质量、提取方法或病原体变异可能导致假阴性。
污染或操作不当可能引起假阳性。
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