旋覆花探针法PCR鉴定试剂盒 新品

产品概述

本试剂盒基于实时荧光定量PCR（qPCR）技术，采用特异性探针法（TaqMan®原理），专用于中药材旋覆花（Inula japonica Thunb.） 的快速、高灵敏度分子鉴定。适用于药材原料、饮片、提取物及成药中旋覆花成分的真伪鉴别和物种溯源，可有效区分近缘种（如欧亚旋覆花 I. britannica）。

检测原理

DNA提取：从样本中提取基因组DNA。

特异性扩增：针对旋覆花ITS2基因片段设计特异性引物及TaqMan探针。

荧光检测：探针5'端标记FAM荧光基团，3'端标记淬灭基团。PCR扩增时，探针被水解，释放荧光信号，通过qPCR仪实时监测，实现靶序列的定性与定量分析。

试剂盒组分

| 组分名称 | 48 tests用量 | 储存条件 |

| PCR预混液（含酶/dNTPs） | 1.2 mL | -20℃ |

| 旋覆花特异性引物探针混合液 | 200 μL | -20℃ |

| 阳性对照（旋覆花DNA） | 50 μL | -20℃ |

| 阴性对照（ddH₂O） | 1 mL | 室温 |

| DNA提取试剂（可选） | 1套 | 室温 |

实验流程

1. DNA提取

推荐使用配套植物基因组DNA提取试剂盒，或参照《中国药典》2020年版通则（如硅胶膜柱法）。

2. PCR反应体系配制（20 μL/反应）

| 组分 | 体积 |

| PCR预混液 | 10 μL |

| 引物探针混合液 | 2 μL |

| 模板DNA | 2 μL (10-50 ng) |

| RNase-Free ddH₂O | 补足至20 μL |

3. qPCR程序设置

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 | 信号采集 |

| 预变性 | 95℃ | 3 min | 1 | 否 |

| 扩增 | 95℃ | 15 sec | 40 | 是 |

| | 60℃ | 45 sec | | |

注：探针检测通道：FAM，淬灭基团：BHQ-1。

结果判读

阳性：Ct值 ≤ 35，且扩增曲线呈典型S型。

可疑：35 < Ct值 ≤ 40，建议重复实验。

阴性：Ct值 > 40 或无扩增曲线。

验证要求：

阳性对照：Ct值 ≤ 30

阴性对照：无扩增（Ct值 = Undetermined）

性能参数

| 项目 | 性能指标 |

| 特异性 | 不与I. britannica等近缘种交叉反应 |

| 灵敏度 | 可检测≤1% (w/w) 的旋覆花掺伪 |

| 重复性 | CV < 5% (n=10) |

注意事项

实验需在无菌环境（超净台）中进行，避免DNA污染。

提取DNA的OD260/280应在1.7~2.0之间，降解样本可能导致假阴性。

若检测样本为成药，需去除干扰成分（如多糖、酚类）。

本试剂盒仅限科研使用，不用于临床诊断。

应用场景

中药材GAP基地物种鉴定

药品生产企业原料质控

市场监管部门打假抽样

实验室研究（如种质资源分析）

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