隐球菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒

隐球菌通用探针法荧光定量PCR试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒用于检测样本中隐球菌属的DNA，适用于科研实验，不可用于临床诊断。

产品特点

即开即用：用户仅需提供样品核酸模板（DNA或RNA），无需额外配制主反应混合液。

高灵敏度与特异性：

探针及引物针对隐球菌保守序列设计，可检测低至几百拷贝/反应的靶标，且与其他病原体无交叉反应。

采用探针法（TaqMan原理），通过5'核酸外切酶活性切割探针释放荧光信号，定量准确性高。

多重质控：

提供无传染性阳性对照（DNA片段），便于区分假阴性结果。

推荐设置样品制备阳性对照（PC）和阴性对照（NC）。

兼容性：支持常规RNA/DNA提取方法，或搭配柱式核酸纯化试剂使用。

灵活应用：可进行定性（阴阳性判定）或定量分析（线性范围达5个数量级）。

试剂盒组成

| 成分 | 规格 | 保存条件 |

| qPCR缓冲液 | 500 μL | -20℃ |

| 酶预混液（含逆转录酶） | 100 μL | -20℃ |

| 荧光探针（FAM标记） | 50 μL | 避光，-20℃ |

| 引物混合液 | 100 μL | -20℃ |

| 阳性对照（1×10^8 拷贝/μL） | 50 μL | -20℃ |

| 模板稀释液 | 1 mL | -20℃ |

| 说明书 | 1份 | - |

操作步骤

1. 标准曲线制备（10倍梯度稀释）

注意事项：稀释需在独立区域操作，避免气溶胶污染。

步骤：

标记6管（7至2号），分别加入45 μL模板稀释液。

取5 μL阳性对照（1×10^8 拷贝/μL）加入7号管，混匀后得1×10^7 拷贝/μL标准品。

依次稀释至2号管（1×10^2 拷贝/μL），冰上保存备用。

2. 样品核酸提取

推荐使用商业核酸提取试剂盒，或按以下方法：

PC设置：阳性对照稀释10^4倍后作为提取对照。

NC设置：以超纯水作为阴性对照。

3. qPCR反应体系（20 μL/管）

| 组分 | 体积（μL） |

| qPCR缓冲液 | 10 |

| 酶预混液 | 2 |

| 探针 | 1 |

| 引物混合液 | 2 |

| 模板（样品/标准品/对照） | 5 |

4. 反应程序

| 步骤 | 温度 | 时间 | 循环数 |

| 逆转录* | 50℃ | 30 min | 1 |

| 预变性 | 94℃ | 10 min | 1 |

| 扩增 | 94℃ | 15 sec | 40 |

| | 60℃ | 1 min（采集FAM信号） | |

*注：若检测DNA模板，可跳过逆转录步骤。

数据分析

定量检测：以标准品log浓度为横轴、Ct值为纵轴绘制曲线，计算样品浓度。

定性检测：

阳性：Ct ≤ 35，且扩增曲线呈S型。

阴性：Ct ≥ 40。

可疑（35 < Ct < 40）：需复测确认。

注意事项

避免反复冻融试剂，分装保存。

实验分区操作（试剂准备区、样品处理区、扩增区），防止污染。

本产品仅限科研使用，有效期12个月（-20℃保存）。

公司正在出售的产品