格特隐球菌探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 格特隐球菌探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Cryptococcus gattii Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4815 |
产品特点
即开即用：用户仅需提供样品DNA模板，无需额外优化引物或探针。
高灵敏性与特异性：引物及探针针对格特隐球菌高度保守区设计，避免与其他微生物DNA交叉反应。
双功能检测：支持定性与定量分析，定量线性范围达5个数量级（10^1–10^6拷贝/μL）。
内置对照：提供无传染性DNA片段作为阳性对照，便于区分假阴性结果。
组分清单
| 编号 | 成分 | 规格 | 包装标识 |
| 试剂一 | 2×Probe qPCR MagicMix | 500μL | 本色盖 |
| 试剂二 | qPCR引物混合液 | 100μL | 白盖 |
| 试剂三 | 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL | 黄盖 |
| 试剂四 | qPCR探针（FAM通道，NFQ淬灭） | 50μL | 棕色管 |
| 试剂五 | 阳性对照（1×10^8拷贝/μL） | 50μL | 红盖 |
| - | 使用手册 | 1份 | - |
运输与保存
运输条件：低温运输（-20℃冰袋）。
保存条件：-20℃避光保存，有效期12个月。
操作步骤
标准曲线制备（10倍梯度稀释）
标记6支离心管（6–1号），每管加入45μL模板稀释液。
取5μL阳性对照（10^8拷贝/μL）加入6号管，震荡混匀得10^7拷贝/μL标准品，依次稀释至10^1拷贝/μL。
所有稀释步骤需在独立区域进行，避免交叉污染。
样品DNA制备
建议设置N+2个样本（含阳性/阴性对照），使用兼容的DNA提取试剂盒纯化。
qPCR反应体系（20μL）
| 成分 | 样品管 | 阴性对照 | 标准曲线管 |
| 2×Probe MagicMix | 10μL | 10μL | 10μL |
| 引物混合液 | 2μL | 2μL | 2μL |
| 探针 | 1μL | 1μL | 1μL |
| 模板DNA/标准品/水 | 7μL | 7μL水 | 7μL标准品 |
PCR程序
| 步骤 | 温度 | 时间 |
| 预变性 | 95℃ | 3分钟 |
| 40循环 | 95℃ | 15秒 |
| （FAM信号采集） | 60℃ | 60秒 |
数据分析
定量检测：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样品浓度。
定性检测：阴性对照Ct≥40；阳性对照Ct≤30（或39），样品Ct≤阈值判为阳性。
注意事项
严格分区操作（样本处理、试剂配制、扩增），避免污染。
使用带芯吸头，每次更换枪头。
反应液避光保存，避免反复冻融。
实验后需用10%次氯酸或75%乙醇消毒工作台。
局限性声明
检测结果可能受样本质量、提取效率、病原体变异等因素影响，建议结合临床指标综合判断。
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