犬血巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒
商品属性
产品名称 | 犬血巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒 | 英文名称 | Bartonella henselae (Canine) Probe-based Fluorescent Quantitative PCR Kit |
规格 | 50T | 货号 | PR4821 |
产品概述
本试剂盒基于探针法荧光定量PCR技术，专用于犬血样本中巴尔通体（Bartonella spp.）的定性或定量检测。通过特异性引物和探针靶向巴尔通体保守基因序列，结合内参基因（如GAPDH）实现高灵敏度、高特异性检测，并支持全流程质控。
检测原理
靶标设计：针对巴尔通体保守基因（如gltA）设计引物及TaqMan探针，确保覆盖不同亚型。
荧光信号：探针5'端标记FAM荧光基团，3'端淬灭基团，PCR扩增时释放荧光信号，通过Ct值定量分析。
内标系统：内置GAPDH基因或人工合成内标，避免假阴性。
试剂盒组成
预混反应液：含dNTPs、酶、缓冲液等（冻干微球或液体形式）。
阳性对照：1×10^5 copies/μL 巴尔通体标准品。
阴性对照：无核酸酶水。
核酸提取试剂（可选）：兼容柱式或免提方法。
操作步骤
1. 样本处理
采集与保存：全血/血浆样本常规采集，-20℃保存（运输需泡沫箱加冰）。
核酸提取：推荐使用配套提取试剂或市售RNA/DNA提取试剂盒。
2. 标准曲线制备
将阳性对照梯度稀释（10^5至10^0 copies/μL），分装6管，冰上保存。
每稀释度重复3次，确保线性范围（R²≥0.99）。
3. PCR反应体系（20μL）
| 组分 | 体积（μL） |
| 预混反应液 | 15 |
| 模板DNA/RNA | 5 |
程序设置：
95℃ 5min（预变性）→ 95℃ 10s，60℃ 30s（40循环，荧光采集）。
4. 质控要求
阴性对照：Ct≥40或无扩增。
阳性对照：Ct≤36且呈典型S型曲线。
结果判读
定量分析：以标准曲线log值为横轴、Ct值为纵轴计算样本浓度。
定性分析：
阳性：Ct≤36，扩增曲线正常。
可疑：36<Ct<40，需复测。
阴性：Ct≥40或无扩增。
注意事项
分区操作：样本处理、试剂配制、扩增需独立区域。
防污染措施：使用一次性耗材，实验后以10%次氯酸或75%酒精清洁台面。
试剂保存：避光、避免反复冻融，反应液需完全混匀后离心。
交叉反应：已验证与常见犬猫病原体（如犬细小病毒、猫冠状病毒等）无交叉。
性能参数
灵敏度：50 copies/Test。
特异性：100%（临床验证262例样本）。
稳定性：-20℃保存12个月。
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