产品介绍:

基于荧光定量PCR(qPCR)技术,该试剂盒具有灵敏度高、特异性强、检测速度快的特点,是目前兽医临床上诊断犬细小病毒感染的首选方法之一。
产品名称 | 犬细小病毒(CPV)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3701 |
以下是该试剂盒的详细技术解析和应用指南:
1. 核心检测原理

该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法。
靶点设计: 针对犬细小病毒基因组中的保守区域(通常是编码衣壳蛋白VP2的基因片段)设计特异性的引物和探针。
检测机制: 在PCR扩增过程中,如果样本中含有CPV的DNA,探针会被特异性切割,释放出荧光信号(通常为FAM通道)。仪器实时监测荧光信号的增加,从而判断样本中是否存在病毒核酸。
2. 试剂盒的关键性能指标

高灵敏度: 检测下限极高,部分产品可检测到 10-500 拷贝/μL 的病毒DNA,远高于试纸条(ELISA)的灵敏度,能更早发现感染。
高特异性: 仅针对犬细小病毒(包括CPV-2a, 2b, 2c等亚型)反应,不与犬瘟热病毒、犬冠状病毒、伪狂犬病毒等发生交叉反应。
检测时间: 整个检测过程(含核酸提取)通常只需 2小时左右。
3. 试剂盒组成(典型配置)

一个标准的试剂盒(以25T/盒为例)通常包含以下组分:
组分名称 作用 保存条件
PCR反应液 含dNTPs、缓冲液、Mg²⁺、引物/探针 -20℃ 保存
酶混合液 含DNA聚合酶(Taq酶) -20℃ 保存
阳性对照 含CPV靶基因的质粒或灭活病毒 -20℃ 保存
阴性对照 无核酸酶水 2-8℃ 保存
4. 适用样本类型
粪便/肛拭子: 最主要的检测样本,因为病毒主要通过粪便排毒。
全血/血清: 用于检测病毒血症。
组织样本: 如心肌、肠系膜淋巴结(主要用于病死动物的检测)。
操作流程简述

样本处理: 采集粪便或血液,进行核酸提取(通常使用离心柱法或磁珠法)。
反应体系配制: 在冰上将反应液、酶液、模板DNA(及对照)混合。
上机扩增: 将反应管放入荧光定量PCR仪(如ABI 7500、Bio-Rad CFX96等),设置FAM通道检测。
结果分析: 根据扩增曲线和Ct值(阈值循环数)判断结果。
6. 结果判读标准(参考)
阳性(+): 出现典型的S型扩增曲线,且 Ct值 ≤ 35-38(具体阈值依厂家说明书而定),表明样本中存在犬细小病毒核酸。
阴性(-): 无Ct值,或Ct值 > 38/40,且无明显的指数增长期。
可疑(±): Ct值在35-38(或38-40)之间,建议重新检测或重新采样。
特别提示
区分CPV亚型: 普通的CPV检测试剂盒通常检测的是通用型(检测所有CPV-2亚型)。如果你需要区分是CPV-2a、2b还是2c亚型,需要使用专门的分型检测试剂盒(通常采用多重PCR或高分辨率熔解曲线分析)。
临床意义: 该检测结果为“病毒核酸”阳性,代表存在病毒遗传物质,但不一定代表正在发病(如潜伏期或康复期排毒)。需结合临床症状(如呕吐、血便、白细胞下降)进行综合诊断。
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通用操作流程与注意事项:

1. 样本制备
使用核酸提取试剂盒纯化DNA/RNA,需设置阳性、阴性对照。
关键点:避免交叉污染,阳性对照单独存放。
2. 反应体系配置
常规PCR:引物、dNTPs、Taq酶、模板DNA。
qPCR:需额外加入探针或染料。
3. 扩增程序
常规PCR:
预变性→循环扩增→延伸
qPCR:
预变性→循环扩增(荧光采集)
4. 结果判读
常规PCR:电泳观察条带大小(如阳性对照需出现预期条带)。
qPCR:Ct值≤35为阳性,阴性对照无信号。
关键字: 犬细小病毒;CPV ;核酸检测试剂盒;荧光PCR;
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