产品介绍:
布鲁氏菌病(简称布病)是羊养殖业中常见的人畜共患病,会导致母羊流产、公羊睾丸炎以及不孕不育。由于布鲁氏菌培养困难且生物安全风险高,基于荧光PCR的核酸检测已成为目前临床确诊和检疫筛查的首选快速方法。
产品名称 | 羊布氏杆菌(BS)核酸检测试剂盒(荧光PCR法) |
产品分类 | 荧光PCR |
规格 | 50T |
货号 | AP3729 |
以下是基于现有产品信息(如上海臻科等品牌)整理的该试剂盒详细技术解析:
1. 核心检测原理
该试剂盒通常采用TaqMan荧光探针法(探针法)。
靶点基因: 针对布鲁氏菌基因组中的保守序列设计特异性引物和探针。常用的靶基因包括 BCSP31(31kDa外膜蛋白基因)、IS711 插入序列或 omp25/omp31 等。
检测机制: 提取样本DNA后进行PCR扩增。若样本中含有布鲁氏菌DNA,探针被切割释放荧光信号(通常为FAM通道),仪器实时监测并判断结果。
2. 试剂盒的关键性能指标
高特异性: 仅针对布鲁氏菌反应,不与巴氏杆菌、大肠杆菌、沙门氏菌等其他细菌发生交叉反应。
高灵敏度: 检测下限通常可达 10² - 10³ copies/mL,部分产品可检测到10 CFU/mL,能发现早期或隐性感染。
检测时间: 全程(含核酸提取)约 2-3小时。
3. 试剂盒组成(典型配置)
一个标准的50T(次)试剂盒通常包含以下组分:
组分名称 作用 保存条件
PCR反应液 含dNTPs、Mg²⁺、缓冲液、引物/探针 -20℃ 保存
酶混合液 含Hot Start Taq DNA聚合酶 -20℃ 保存
阳性对照 含布鲁氏菌靶基因的质粒或灭活菌液 -20℃ 保存
阴性对照 无核酸酶水 2-8℃ 保存
适用样本类型
组织样本: 脾脏、淋巴结、睾丸、胎盘(流产胎儿组织)。
体液/分泌物: 全血、乳汁、阴道分泌物、关节液。
精液: 用于种公羊的检疫。
5. 结果判读标准(参考)
阳性(+): FAM通道出现典型的S型扩增曲线,且 Ct值 ≤ 35-38(具体阈值依厂家说明书而定),表明样本中存在羊布氏杆菌核酸。
阴性(-): 无Ct值,或Ct值 > 38/。
可疑(±): Ct值在临界值附近(如35-38),建议复检或重新采样。
6. 临床与应用意义
流产病因诊断: 快速判断羊群流产是否由布鲁氏菌感染引起。
种羊净化: 用于种羊场的布病净化项目,淘汰阳性种羊。
公共卫生: 由于布病是人畜共患病,该检测对保障养殖人员和兽医的人身安全至关重要。
特别提示
生物安全: 布鲁氏菌属于生物安全三级(BSL-3)病原体,操作临床样本(尤其是培养环节)时务必严格遵守生物安全二级(BSL-2)或以上防护规范。
疫苗干扰: 如果羊群接种过布鲁氏菌疫苗(如S2、M5株),PCR检测可能会出现阳性结果(因为检测的是核酸,无法区分死菌和活菌)。此时需要结合血清学检测(如SAT、ELISA)进行综合判断。
PCR试剂盒的核心类型:
1. 常规PCR试剂盒
原理:通过引物扩增目标DNA片段,产物经琼脂糖电泳检测。
特点:操作简单、成本低,适用于定性检测(如牛疱疹病毒1型PCR试剂盒)。
典型应用:动物病原体筛查。
2. 荧光定量PCR(qPCR)试剂盒
探针法(TaqMan):
利用特异性探针结合目标序列,荧光信号实时监测扩增过程。
优势:高特异性(如牛白血病病毒试剂盒)、宽线性范围(10²–10⁷拷贝/μL)。
染料法(SYBR Green):
染料嵌入双链DNA发光,成本较低,但需优化引物特异性。
3. 恒温扩增试剂盒
技术:LAMP、RPA等,无需热循环仪,适合现场检测。
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关键字: 羊布氏杆菌;BS ;核酸检测试剂盒;荧光PCR法;
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